Western blot和荧光蛋白分子量标准一级代理

Western 实验步骤

BSA 蛋白标准液、BCA 试剂、PBS。 1) 标准曲线：用 BSA 和 PBS 混合总体积为 20 μL 的溶液做标准曲线，具体操作如下:按照 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 含量稀释 BSA 蛋白标准品，每个浓度（0、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μLBSA，其余用 PBS 补齐至 20 μL）梯度做一个复孔。 2) 样品稀释测蛋白浓度：10 倍稀释法：取 18 μLPBS+2 μL 样品上清（经上步处理的样品 12000 r/min 离心 5 min

Western-blot实验操作手册

-PAGE过程恒压的方式，通常把电压设置在100V，然后设定定时时间为90-120分钟。设置定时可以避免经常发生的电泳过头。 通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳，或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况，预计目的蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。 3. 转膜(Transfer)： (1)膜的选择：推荐在Western实验中选用PVDF膜。 硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纤维素膜比较水浴加热3-5分钟，以充脆，在操作过程中特别是用镊子夹取

各类western转膜条件

除了抗体原因，转膜恐怕是western blot成败的最关键因素。 园子里好多好多人在求助转膜时间，因此我们总结了一系列分子量蛋白转膜的时间，希望对大家有用。 蛋白来源：RAW264.7 总蛋白 蛋白名称（可保密）：一些转录因子 蛋白分子量：40~70 KD WB用膜类型、孔径：0.45 NC 转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400 mA 转膜时间：60~90 min PS.其实