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文献和实验实验,其实对聚合酶的要求挺高的。实验室里的师兄师姐一般都买进口的高保真酶。有一次,我听信了一位销售人员,他们在促销。结果我比较背,当时那还是一个新牌子,国产的,性能都还不稳定的,我就这样当了炮灰。 结果,我浪费了 1 个月的时间。这也就算了,谁知道后面临毕业的时候,用这个酶构建出来的重组菌保存遇到了问题,谁能想,复苏的时候基因还突变了呢?幸好当时用了其他的酶也克隆了,才躲过一劫。 但从那以后,我心里是有阴影了。同是科研人,相煎何太急? 哪些东西
病毒的存在. 2.方法评估:PCR作为一种新型诊断方法,特别是它的灵敏度高,可检测到小致3个PFU,PCR的敏感性较细胞培养高,已初步在临床病毒检验工作中显示出了较大的优越性.但该方法由于高灵敏度,易产生污染而导致假阳性,且需要特殊的仪器和进口试剂,在普及推广中目前有困难. 3.研究与改进:(1)DNA诊断区的选择.目前均选择高保守序列区.主要集中在DNA聚合酶基因区、胸腺嘧啶核苷激酶(TK)基因区、糖蛋白D基因区. (2)引物设计.引物的大小在20~28个寡核苷酸,引物的数量有2个
免疫分析(ECLEIA)。EIA与聚合酶链反应结合形成的PCR-EIA分析等。(4)改进固相载体的技术传统ELISA应用的固相载体是聚苯乙稀微孔板,聚苯乙烯珠或条,后发展为硝酸纤维素膜、活化滤纸、硅片、尼龙、利用高分子材料合成的各种固相微粒等。为提高固相表面的结合容量,增加结合物的范围而改造聚苯乙烯的表面,如用化学偶联法导入功能性醛基、酰基、烷胺基等以更好地与蛋白质,多肽的羧基结合,用位点导向性共价偶联法引入亲和素,蛋白A,多聚赖氨酸等,以牢固地捕获蛋白或多肽,超平整聚苯乙烯表面的制备,克服了表面粗糙带来的不均
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