微量质粒快速提取试剂盒北京厂家

特别提示：包括微量质粒快速提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：微量质粒快速提取试剂盒
英文名称：MicroPlasmid Rapid Extraction Kit
产品货号：WH0034
产品规格：50次|200次

本试剂盒采用先进的硅胶膜吸附技术，高效专一地结合质粒DNA，操作简单、快速。每次处理1-4ml过夜培养的细菌培养液，仅需8min即可提取多至24μg的质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

产品特点：
·快速：步骤少，操作简单，仅需8min。
·高效：可提取菌体85%以上质粒DNA。
·配备了独特的颜色指示剂，可以清晰辨明抽提过程中样本的裂解程度，确保得到高效率、高纯度的质粒DNA。

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率	质粒
高拷贝质粒	1-4ml	6-24μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒	1-4ml	3-10 μg	pBR322,pACYC及其衍生载体pSC101 及其衍生载体，SuperCos,pWE15

试剂盒组成：

组分	50T	200T
溶液P1	15ml	60ml
溶液P2	15ml	60ml
溶液P5	20ml	80ml
漂洗液PWT	15ml	50ml
洗脱缓冲液TB	15ml	30ml
RNase A（10mg/ml)	150μl	600μl
颜色试剂	75μl	300μl
吸附柱CP3	50个	200个
收集管（2ml)	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min以溶解沉淀。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月。加入RNase A和颜色指示剂后的溶液P1应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液P1在使用前先加入RNase A和颜色指示剂（将试剂盒中提供的RNase A和颜色指示剂全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使用前请先检查溶液P2和P5是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．注意不要直接接触溶液P2和P5，使用后应立即盖紧盖子。
4．所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g )。
5．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
6．颜色指示剂的使用：颜色指示剂是一种指示剂，用以指示整个操作的正确性，对人体无害。使用时按照颜色指示剂:溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色；添加溶液P2之后彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色，则说明充分裂解；再添加溶液P5至彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，说明中和复性充分。


使用方法：
使用前请先在漂洗液PWT中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．取1-4ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12000rpm（~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2．向留有菌体沉淀的离心管中加入150μl溶液P1（请先检查是否已加入RNase A和颜色指示剂），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
  注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
  颜色指示剂的加入对于后续PCR、酶切和测序都没有影响。使用时按照颜色指示剂:溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色。
3．向离心管中加入150μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
由于使用了颜色指示剂，添加溶液P2彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色。如果在紫色中混杂有浑浊的红色，则说明裂解不充分，继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色。
4．向离心管中加入350 μl溶液P5，立即快速地上下颠倒混匀12-20次，充分混匀，此时将出现絮状沉淀。12000rpm （~13400×g)离心2 min。
  注意：加入溶液P5后应立即混合，应快速上下颠倒混匀，避免产生局部沉淀。上清中含有少量微小白色沉淀对后续实验没有任何影响。如果上清中存在大量微小白色沉淀，可再次离心后取上清。由于使用了颜色指示剂，添加溶液P5彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，如果在黄色中混有紫色，则说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色。
5．将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。12000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
6．向吸附柱CP3中加入300 μl漂洗液PWT（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g)离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
7．将吸附柱CP3放入收集管中,12000rpm （~13400×g)离心1 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
8．将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB，12,000rpm （~13400×g)离心30 sec将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。

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