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186
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半年
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现货
- 供应商:
百奥莱博
- 规格:
10个/包
特别提示:包括50ml亲和层析柱空柱(2.5*16)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:50ml亲和层析柱空柱(2.5*16)
英文名称:Affinity Columns(without media),50ml(2.5*16)
产品货号:QN3256
产品规格:10个/包
亲和层析柱是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。如抗原和抗体,蛋白质A与一些抗体,重组蛋白质和一些金属离子之间,均具有专一的亲和力,在一定条件下能紧密结合成复合物,而这种结合又是可逆的,改变条件可相互解离。当把可结合的一对分子的一方(称配体)结合在惰性载体上使其固相化,另一方随流动相流经该载体,双方即结合为一整体。然后设法将它们解离,从而得到与配体有特异结合能力的某一特定的物质。
我公司提供的亲和层析柱空柱是专门为实验室小批量纯化抗体、重组蛋白或其它分子而设计,方便进一步进行科学研究。
亲和层析柱空柱所用的柱子为聚bǐng烯塑料,这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒,不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWMPE为原料,经独特的工艺加工而成,具有亲水性。筛板在装填时安置在填料基质的上下端,以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWMPE生产技术,该筛板能保证使用重力法时的流速为1~2mL/分钟或1~2滴/秒。同时,该筛板和其它供应商相比,不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。另外,该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡,气泡会使流速降低,液体通过基质不均匀。
亲和层析柱常用于抗体纯化
金黄色葡萄球菌蛋白A(Protein A,SPA)能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合,结合的亲和性次序依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。SPA除与IgG结合外,还能与血清中少量的IgM和IgA结合,SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率:IgG为90%~98%,IgM为2%~30%,IgA为1.5%~20%。纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体,也可以用Protein G,Protein L或异源性抗体作为配体。
近年来,随着生物技术,特别是基因工程技术的迅猛发展,重组蛋白表达和纯化越来越容易。常用的重组蛋白表达策略是把蛋白与亲和标签融合表达,利用亲和标签一步纯化出目标蛋白。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性,就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合,从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方法不同之处在于,无需针对不同的蛋白质开发特定的配体和方法。采用保护蛋白质结构和功能完整性的温和条件,可一步亲和层析从粗提物中纯化出重组蛋白,纯度可达90%以上。
亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。亲和标签系统一般具有以下特征:
(a)一步的吸附纯化;
(b)对三级结构和生物活性影响小;
(c)可方便且专一的去除以产生天然蛋白质;
(d)在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确;
(e)适用于大量的不同蛋白质。但是没有哪个标签是完美的,只能根据实际需要去自己筛选,下表是部分的标签以及纯化的方案。
我公司销售的50ml亲和层析柱空柱(2.5*16)北京厂家,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验是活性微珠有商品出售,表2-4列举5种常用的活性微珠及其生产厂家。 【准备工作】 应用抗体亲和层析柱对各种蛋白质进行纯化时,关键是在尽量温和的条件下将抗原从层析柱上洗脱,才能保持蛋白质的结构和/或功能不发生变化。洗脱的难易程度取决于抗原与抗体之间结合键的类型和数量。在制备层析柱用于大规模纯化之前,有必要对所有可利用的抗体进行测试,从中选择适当的抗体制备亲和层析柱。 *所用的抗体溶液中不应含有无关的化合物,因其可通过反应基团结合到活性微珠上,注意结合反应是发生在抗体
。按厂家说明准备滤柱,用 20 双柱床体积 PBS 注入滤柱,直到缓冲液水平刚刚降低到柱床顶部,关闭滤纸底部的阀门或使用塑料粘土(或 parafilm )封闭底部,使滤柱不再流动。 2.用0.1mol/L 硼酸钠或碳酸钠的制备浓度至少为 2mg/ml 的抗体溶液(pH9.0)。含一级胺的外来分子应避免引入。 3.用无水DMSO 溶解(优级纯) FITC或TRITC至1mg/ml。每次标记反应时需即时配置。 4.每 1ml 蛋白溶液加50ul染液,每次都要5ul 慢慢加入,加入时应轻轻连续搅拌
作为运行缓冲液,观察解离相2一10分钟。9. 再生芯片的表面,并进行下一个scFv分析。可以编写程序使此过程自动进行,使40~50个scFv的数值能自动进行过夜分析。使用Biacore厂家提供的软件,可对每个所分析的scFv自其感应图的解离部分测定出表观κoff值。经过上述分析后,就能根据Aof/值高低将克隆依次排列。然后,纯化解离速率最低的scFv并测定其Kd值。这种载体附加了C末端六组氨酸标签,因此,用固相金属亲和层析(IMAc)从外周质中纯化出scFv.而这对于那些在已含有六组氨酸标签的噬菌
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