细胞内pH值检测试剂盒北京现货

特别提示：包括细胞内pH值检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞内pH值检测试剂盒
产品货号：HR0958
产品规格：100T

细胞内pH值检测试剂盒采用BCE细胞内pH值荧光探针检测胞内pH值的变化。BCE是pH敏感的荧光染料，碱性条件下荧光强更高，反之酸性条件下变低，从而BCE可被用于监测细胞内pH 变化BCE 是可以穿透细胞膜的荧光染料，BCE本身没有荧光，穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成荧光物质，从而被滞留在细胞内。产生的荧光物质最大激发波长为503nm，最大发射波长为 528nm，其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映细胞内pH值得变化情况。
BCE主要用于哺乳动物细胞的研究，也用于其他动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH 水平检测。在有细胞内pH 变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525～530nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内pH值的变化。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● pH探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● Hanks balanced salt solution(HBSS)或HEPES或PBS
● 移液器及吸头 ● 激光共聚焦显微镜或流式细胞仪

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后立即进行分析。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。以下方法仅供参考。
●可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 帮助BCE 更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存 BCE溶液。

1．染色工作液的配制：
用纯水10倍稀释10×稀释液,然后据样品数量用该稀释液稀释BCE
溶液400倍-4000倍，配制成BCE染色工作液。
【注】：
a、推荐该探针加载浓度在400-4000倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
b、也可以用以下培养基用于染色，直接将pH探针加入，终浓度在400-4000倍稀释即可。最佳的培养基应能兼顾两方面--染料加载和良好的细胞反应。可能的选择有：生长培养基+10% 胎牛血清(FBS)+20 mM HEPES；生长培养基+1% FBS+20 mM HEPES；Hank’s BSS 1×+20 mM HEPES+1% FBS；Hank’s BSS 1×+20 mM HEPES +1% BSA。
c、优化细胞种板的密度是很有必要的，保证了过夜培养后每孔可以形成密度相似的均一单细胞层。
通过适当的调整种板时的密度，细胞可以培养超过一天来达到实验当天的要求。粘附性弱或生长不规则的细胞最好在用多聚赖氨酸、层黏蛋白或胶原蛋白包被过的多孔板中培养。
2．将BCE染色工作液加入细胞，在37℃孵育30-60分钟。
【注】：
a、最佳的孵育时间取决于细胞类型。由于荧光染料对细胞是有毒的，所以要严格控制孵育时间。45分钟、37℃是通常对大多数细胞都有效的孵育条件，一般也作为方法摸索时的起始推荐条件。
如果孵育30分钟可以得到一个可接受的荧光信号，建议采用更短时间的孵育条件。
b、关于阴离子交换蛋白抑制剂：一些类型的细胞通过阴离子交换蛋白转移阴离子至细胞外，这些阴离子包含了BCE荧光染料。这样不仅仅导致了染料加载效果的减弱，同时导致了最终数据结果的误差； 丙磺舒是一种阴离子交换蛋白抑制剂，被加入到加载培养基中后可以增加染料保留在细胞内的比例。已知的一个需要丙磺舒的细胞类型是CHO。尽管丙磺舒可以延缓染料从细胞内被转移至胞外，但其对细胞来说有一定的毒性，因此染料加载后的孵育时间应尽可能控制在最短时间内。丙磺舒一般不需要使用，有条件则使用。
3．用PBS或HBSS 洗涤细胞2-3次。用HBSS重悬细胞.
4．然后用该细胞进行荧光pH检测。激发波长 488-506nm，发射波长526nm。

我公司销售的细胞内pH值检测试剂盒北京现货，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。