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文献和实验如何。无论什么品牌的,无论进口还是国产的,都会有用得不错的产品,也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品,不同品牌之间,甚至同一品牌的不同产品之间,抗体品质差异都较为明显,而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择,但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的,所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下,抗体的售后就尤为重要,遇到抗体品质障碍时,能够确保有效地解决问题,不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的,无疑对这个问题
后冻起来。前天拿出来溶解,结果种入细胞(贴壁生长)后观察,发现细胞是均匀散开的,6小时后再看,发现它们聚成一团一团的,12小时及24小时看还是聚团的。试剂去年用的效果很好,这个细胞株的侵袭转移能力也是前人确定的,只是不明白为何现在做的时候连隐性对照的细胞也会聚团而不是转移? 答:我也遇到过这样现象,后来重复时发现,最大可能是加入孔里的牛血清白蛋白和FN没有凝,即使凝了也还有残留液体(我用的是matrigel胶,放37度过夜仍会有),在加入细胞悬液前要吸出残留液体,再加无血清培养基水化基膜
。用pHMB进行半胱氨酸衍生前后MALDI-TOF MS观察到的质量位移可确定自由巯基的数目。巯基的总含量可由二硫化物还原反应和随后的衍生过程确定。有时可观察到以下竞争反应:半胱氨酸与试剂中可能存在的汞离子反应产生变体。若时间足够长,即使低浓度汞离子都可置换有机汞试剂。因此,为了进行肽或蛋白中硫醇的定量衍生,必须在使用pHMB前进行纯化以除去Hg2+。Wu等使用2-硝基-5-硫氰苯甲酸(NTCB)进行化学修饰,测出游离半胱氨酸和胱氨酸基团的数目和位置。在非还原性条件下,此试剂用于选择性地氰基化蛋白中的半胱
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