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细胞缺氧检测试剂盒RU(dpp)3cl2

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  • ￥1800
  • KA&M-BIO
  • 国产
  • 01005B
  • 2025年07月16日
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    • 保存条件：

      -20℃ 避光

    • 英文名：

      细胞缺氧检测试剂盒RU(dpp)3cl2

    • 库存：

      999

    • 供应商：

      圻明

    • 规格：

      200T

    细胞缺氧检测试剂盒RU(dpp)3cl2现货供应。您在使用过程中有什么问题，欢迎咨询技术部门或者销售办事处。

    使用方法：
    使用注意事项：
    螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液
    体洒落。
    荧光探针在
    2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温，变成液体状态后离心至管底部再产品说明书
    5
    开盖。
    荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
    探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标
    记情况是否正常。
    尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
    RU(DPP)3 在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
    对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察缺氧的变化。
    RU(DPP)3 探针标记：
    原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。
    1. 按照 1:25-500 用含血清培养基稀释 RU(DPP)3 探针。
    【注】:
     RU(DPP)3 溶液可 25-500 倍稀释，以此染色液更换细胞培养液；也可直接向细胞
    孵育液体中加入 RU(DPP)3 探针溶液至所需浓度。
     根据细胞缺氧程度的不同， RU(DPP)3 终浓度可选择在 25-500 倍稀释的范围，100
    倍稀释适合大多数细胞样本。孵育时间可选择 15-60 分钟，在 37℃进行避光孵育。
    2. 去除细胞培养基，用 PBS 洗细胞一次。
    3. 加入适当体积稀释好的 RU(DPP)3 探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，
    通常对于 96 孔板每孔加入 200ul 染色液，六孔板的一个孔加入稀释好的
    RU(DPP)3 探针不少于 1 毫升。
    4. 在 37℃细胞培养箱内避光孵育 15-60 分钟。
    5. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的 RU(DPP)3 探
    针。
    【注】:
     也可以用HBSS/PBS 洗涤细胞。
    6. 用 PBS 重悬细胞。
    7. 检测细胞荧光。
    【注】:
     缺氧损伤程度高，荧光强度高。
     使用 455 nm 激发波长，613 nm 发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强
    弱。
    收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
    1. 按照 1:25-500 倍用含血清培养基稀释 RU(DPP)3 探针。
    【注】:
     RU(DPP)3 溶液可 25-500 倍稀释，以此染色液更换细胞培养液；也可直接向细胞孵
    育液体中加入 RU(DPP)3 探针溶液至所需浓度。
     根据细胞缺氧程度的不同，RU(DPP)3 终浓度可选择在 25-500 倍稀释的范围，100
    倍稀释适合大多数细胞样本。孵育时间可选择 15-60 分钟，在 37℃进行避光孵育。
    2. 离心移除培养基，用 PBS 洗细胞一次。
    3. 细胞收集后悬浮于稀释好的RU(DPP)3 探针中，细胞浓度为1*10 6-2*10 7 /毫6
    产品说明书
    升，37℃细胞培养箱内避光孵育 15-60 分钟。每隔 3-5 分钟颠倒混匀一下，使
    探针和细胞充分接触。
    4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的RU(DPP)3 探
    针。
    【注】:
     也可以用HBSS/PBS 洗涤细胞。
    5. 用 PBS 重悬细胞。
    6. 检测细胞荧光。
    【注】:
     缺氧损伤程度高，荧光强度高。
     使用 455 nm 激发波长，613 nm 发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强
    弱。
    共聚焦/荧光显微镜/酶标仪检测：
    1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取
    25-50μl 细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
    2. 荧光显微镜下，用蓝光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，缺氧损伤细胞被染成
    红色。
    流式细胞仪分析：
    对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用
    0.5~1 ml 冰冷 PBS 重悬细胞（5~10 万）。
    采用 455 nm 波长激发，测定 613 nm 的发射。
    阴性细胞仅有较低的荧光强度，缺氧细胞有较强的红色荧光。



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