亨盖特厌氧试管（螺口）

厌氧菌的分离和培养

则又呈现明亮的黄色。此铜柱可以反复使用，并不断起到除氧的目的。当然H2源也可以由氢气发生器产生。5.2 预还原培养基及稀释液的制备制作预还原培养基及稀释液时，先将配制好的培养基和稀释液煮沸驱氧，而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中，一般琼脂培养基装4.5-5ml，稀释液装9ml，并插入通N2气的长针头以排除O2。此时可以清楚地看到培养基内加入的氧化还原指示剂—刃天青由蓝到红最后变成无色，说明试管内已成为无氧状态，然后盖上螺口的丁烯胶塞及螺盖，灭菌备用。5.3 双歧杆菌样品不同稀释度的制备

双歧杆菌的分离、培养及鉴定

箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。这些方法都需要特定的除氧措施，操作步骤多，较繁琐。本实验介绍的是一种简便的试管培养法——亨盖特厌氧滚管技术，亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趋完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一套完整技术，而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。该技术的优点是：预还原培养基制好后，可随时取用进行试验；任何时间观察或检查试管

不同需氧量微生物的培养原理及方法

害。专性厌氧菌：只能在无氧的条件下生长繁殖的细菌，如产气荚膜梭菌、生孢梭菌。氧气对其有毒害，会抑制其生长甚至致死。二、氧气耐受性：1. 氧气还原为水的过程中，会形成某些有毒的中间产物，如过氧化氢、超氧阴离子等。其反应力强、不稳定，能破坏生物膜和生物大分子，对微生物造成毒害或致死。需氧菌和耐氧菌具有降解这些产物的酶，如过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶等，所以能在有氧条件下生长。而专性厌氧菌缺乏超氧化物歧化酶，所以只能在完全厌氧环境中生长。三、培养方法：培养不同需氧量微生物的试管1~5 试管内的培养基均