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- 库存:
408
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长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
- 规格:
20μg
特别提示:包括pCMV-GLuc 2 对照质粒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:pCMV-GLuc 2 对照质粒
产品货号:SV1658
产品规格:20μg
概述:
所有 GLuc 载体和质粒包含一个人源化的 Gaussia 荧光素酶编码序列,可以在哺乳动物细胞中进行最佳表达。
克隆载体:
pGLuc-Basic 2 载体不含启动子;pGLuc Mini-TK 2 载体含有一小段启动子片段,来源:于单纯疱疹病毒(HSV)胸苷激酶,位于 Gaussia 荧光素酶编码序列上游。将启动子或增强子克隆进入两种载体的多克隆位点(MCS),便可进行启动子和增强子的活性测试。
pTK-GLuc 载体含有单纯疱疹病毒(HSV)胸苷激酶启动子,用于组成型表达 GLuc。在该载体的 GLuc 终止密码子和多聚腺苷酸信号之间包含一段 MCS。被克隆进入 3´ UTR 的序列将成为 GLuc mRNA 的一部分。RNAi 或 miRNA 靶位点等序列可插入 GLuc 的 3´ 非翻译区,以评价 RNAi 或 miRNA的靶序列。
另外,所有的载体(pSV40-GLuc 对照质粒除外)均携带有一个新霉素(Neomycin)抗性标记,用以产生稳定的转染细胞系。
对照质粒:
pCMV-GLuc 2 对照质粒携带有一个组成型的巨细胞病毒(CMV)启动子,可在许多类型的细胞中启动高水平的表达。pCMV-GLuc 2 可以在单独转染实验或与其它报告载体联合使用中作为阳性对照。
pSV40-GLuc 对照质粒在猿猴病毒 40(SV40)启动子控制下组成型表达 GLuc。可以作为转染实验中的阳性对照。该质粒不携带选择标记。
来源:
GLuc 载体和对照质粒经过标准质粒纯化程序,分离自 E. coli 菌株 ER2272。
浓度:
500 μg/ml。
我公司销售的pCMV-GLuc 2 对照质粒现货供应,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验birkin 我在尝试转染某种细胞,载体是购买的商业载体(pCMV6),之前转染HEK293作为预实验,已经用WB证明有效,但是换到现在这种细胞之后就很奇怪,一开始想用短期转,结果WB做不出来,觉得可能是转染率太低,于是又改做稳定转染,用了G418筛选。花了近2个月,细胞稳定下来了,取样做RT-PCR,有相当强的mRNA表达(-RT和对照组转染也做了的,基本没有带,所以不会是污染),谁知做WB还是一点东西都没有……我都快疯了,既然能抗G418,又有大量mRNA
Histochemical detection重组质体的检定
!滤膜覆盖上去后就不要再移动! 4) 等滤膜完全湿透后,以针头在滤膜边缘戳洞做记号 (至少做三个记号)。 小心把滤膜掀起,菌落朝上放置在LB/Amp/IPTG/X-Gluc plate 上。盖上盖子,在37℃培养,若转形株带有接上gus 的质体,菌落应在1~2 h 内转呈蓝色。原培养皿则置回37℃使菌落再长出。 5) 将滤膜与原培养皿对照,标出有蓝色菌落位置。 选取数个菌落,以划单一菌落的方式分别接种在LB/Amp/plate 上,置37℃直至菌落长出。 亦同时接种于3 mL LB/Amp 培养
1. 质粒载体构建不成功(目的片段和载体不能成功连接)的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差:体系中的杂质会降低连接效率,如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体,可以考虑进行纯化后再进行连接; ②目的片段和载体片段使用比例悬殊,或者用量过多或过少:目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内,否则会影响连接效率,具体比例可以草靠连接酶说明书; ③连接条件不当:比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等,可以通过设置对照组来排查原因; ④引物设计问题:比如通过无缝克隆的方式进行连接,同源
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