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文献和实验生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶,底物因荧光素酶的类型而不同(如荧光素)。 常用荧光素酶信息表: 其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶,分别命名为萤火虫荧光素酶(FLuc)和海肾荧光素酶(RLuc),同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶(GLuc)。 萤火虫荧光素酶(FLuc)作为最通用和最常见的报告基因,该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性,可用于原核和真核细胞。FLuc
使用的好处。 图10 未标记外泌体和 NIR 标记外泌体的原子力显微镜图片 Chem Commun (Camb). 2018 Jun 26;54(52):7219-7222. 五、用 Gaussia luciferase(gluc)和截断的 lactadherin 标记: 将 gLuc-lactadherin 构成融合表达的质粒,再将此质粒转染细胞,使细胞分泌的外泌体带有强的萤光素酶活性。将标记的外泌体进行静脉注射入小鼠体内,看外泌体在组织的分布情况。 图11 将表达
birkin 我在尝试转染某种细胞,载体是购买的商业载体(pCMV6),之前转染HEK293作为预实验,已经用WB证明有效,但是换到现在这种细胞之后就很奇怪,一开始想用短期转,结果WB做不出来,觉得可能是转染率太低,于是又改做稳定转染,用了G418筛选。花了近2个月,细胞稳定下来了,取样做RT-PCR,有相当强的mRNA表达(-RT和对照组转染也做了的,基本没有带,所以不会是污染),谁知做WB还是一点东西都没有……我都快疯了,既然能抗G418,又有大量mRNA
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