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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
195
- 英文名:
Yellow Fever Virus( vaccine strain,17D)17D RTPCR
- 保质期:
1年
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件:
低温避光保存
- 规格:
50T /100T
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥3600.0 |
产品名称:黄热病病毒疫苗株17PCR检测试剂盒
英文名称:Yellow Fever Virus( vaccine strain,17D)17D RTPCR
产品特点优势:
1.特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对种属及血清型的特异检测,特异性均达到。
2.重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为。
3.灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4.实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5.优势1:序列资源丰富,除GenBank公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良的保守性和特异性。
6.优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,黄热病病毒疫苗株17PCR检测试剂盒确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集。
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次)。
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
PCR组成及试剂配制:
1、 酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
PCR使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书。阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1. 黄热病病毒疫苗株17PCR检测试剂盒将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2. 加样(样本处理区)
3. 在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
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文献和实验有很多单菌落,菌落PCR呈阳性,而酶切呈阴性(只要是K12株来源的大肠杆菌,或者是旁系,只要用但菌落做模板就能扩增出UNG酶基因,因此做本实验根本不需要购买基因组提取试剂盒) (2)表达载体经过SAP处理时,转化平板没有单菌落时。可以考虑购买的酶活性出问题。 得到的教训是在做表达载体构建时,做酶活性考核的对照实验是重要的。 5:表达与纯化(直接用taq酶的提取方案,只是所用操作要求低温,试剂需要冰上预冷) (1)取已鉴定的阳性克隆,转接20ml含卡那霉素的LB液体培养基,37℃培养,活化
①取材:对70例胃镜受检者(十二指肠球部溃疡31例, 胃溃疡 2例,胃癌2例,各类胃炎28例,十二指肠球炎7例)均在幽门前区钳取组织1~2块,供尿素酶试验和PCR检测。②药盒深圳爱利国公司提供的1min快速尿素酶 试剂 检测Hp,在1min~5min内观看结果。厦门长城生物工程有限公司提供的幽门螺杆菌DNa PCR诊断试剂盒,测Hp保守区的DNA片断,扩增产物为456bp,一步法提取模板,直接扩增,无需分装。③样品处理将小块胃粘膜研磨后用生理
活组织,分别做尿素酶试验(兰州军医学校生产试剂盒),细菌培养及Warthin-Starry银染检查(由本科专职病理医师完成)。另取胃窦粘膜活组织村本一块,置500μlTE(10mmol/LTris.HCI.1mmol/LEDTA)(pH8.0)缓冲液中研碎,加10%SD30μl蛋白酶K(20mg/ml)3ml,55℃消化1h,以等体积苯酚―氯仿提取模板DNA用于PCR检测,标本处理程中以缓冲液做阴性对照。 统计学处理采用配对四格表资料的X 2 检验










