0.5ml冻存管，自立，外旋盖（蓝色），灭菌，18℃到-80

细胞培养从头学——入门篇

，使用时可向100ml培养液中加入1 ml谷氨酰胺溶液。 （九）肝素溶液的配制 含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为℃。使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确可加入0.9ml）即可。 （十）Ⅰ型胶原酶 0.1%Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意：因为Ⅰ

类器官培养与应用——结直肠类器官

清洗后，再次 4℃ 条件下 300g 离心 5min。 17、将所得沉淀按照 1:3-1:5 的比例重复 10-13 步骤（具体比例通过类器官的汇合度确定），完成传代。   类器官冻存 18、取 1-2 个孔的类器官，消化离心后取细胞沉淀，加入 1ml 细胞冻存液。 19、将细胞重悬后转移至冻存管中，利用程序降温盒缓慢降温至 -80℃。 20、第二天，将样品转移到液氮中长期储存。   类器官复苏 21、将液氮冻存的 CRC 类器官放置在 37℃ 水浴锅中进行解冻，水浴时间不宜超过 2min。 22

重组腺病毒构建、扩增及纯化

液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7、培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP,可观察到绿色荧光）。四、重组病毒鉴定 1、转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2、取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞病变。 3、感染后3-5d，当1/3-1/2细胞漂浮时