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- 百奥莱博
- WH0165-YWO
- 北京
- 2025年07月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
128
- 英文名：
Bst X DNA Polymerase
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
8kU|40kU
特别提示：包括Bst X DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：Bst X DNA聚合酶
英文名称：Bst X DNA Polymerase
产品货号：WH0165
产品规格：8kU|40kU
Bst X DNA聚合酶是从Geobacillus中克隆得到的耐热DNA聚合酶。本产品缺失了5"-3"和3"-5"的核酸外切酶活性，比传统链置换酶（Manta 1.0）具有更强的链置换活性,从而使得本产品在等温扩增实验中的表现更加的出色。本产品是通过大肠杆菌表达的重组酶。分子量大小约为66.5kDa。本制品浓度为40U/μl。
产品特点：
·酶比活性高，反应重复性好。
·连接快速，10min即可完成连接反应，省时省力。
·适用性广，无论是粘性末端还是平末端，本产品均有较高的连接活性；无论是DNA连接还是RNA连接，本产品都有很好的适用性。
·热稳定性高，最适反应温度为60~70℃。
·抗逆性好，对非离子表面活性剂和高盐环境的耐受性高。
·链置换活性高，无核酸外切酶活性
适用范围：
1．在二代测序（NGS）应用中，主要用于文库构建过程中的链等温置换反应。比如IonTorrent平台DNA文库构建中的接头切刻平移。
2.其他等温扩增实验。
产品组成：
| 组分 | WH0165-1 | WH0165-2 |
| Bst X DNA Polymerase | 8,000U | 40,000U |
| 10×Bst X Reaction Buffer | 1.5ml | 5×1.5ml |
| 100mM MgSO4 Solution | 1.5ml | 5×1.5ml |
储存条件：-25℃～-15℃保存。
贮存液成分：10mM Tris-HCl，50mM KCl，0.1μM ATP，0.1mM EDTA，1mM DTT，0.1% Triton X-100，50%甘油。
单位定义：1单位活力定义为在65℃，30 min内，将10nmol dNTP掺入到酸不溶物质中所需的酶量。
质量控制：
| 性质 | 描述 |
| 蛋白纯度 | ＞99% |
| 酶活性 | 400,000U/mg |
| 单链核酸外切酶 | 4000U酶中，＜5.0% |
| 双链核酸外切酶 | 4000U酶中，＜1.0% |
| 双链核酸内切酶 | 4000U酶中，未检出 |
| 宿主基因组污染 | 4000U酶中，＜10拷贝 |
使用方法：
在NGS文库构建过程中，一般按终浓度1.5~3 U/μl的量加入Bst X DNA聚合酶。也可根据实验具体情况来调整用量。
反应条件：65℃，30 min。
灭活条件：80℃，10min。
注：1×Bst X Reaction Buffer中镁离子浓度为2 mM，根据不同的实验，镁离子的反应浓度可在2~10 mM之间调整。
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文献和实验的Taq DNA聚合酶就足以进行30轮循环.所用的酶量可根据DNA、引物及其它因素的变化进行适当的增减.酶量过多会使产物非特异性增加,过少则使产量降低.反应结束后,如果需要利用这些产物进行下一步实验,需要预先灭活Taq DNA聚合酶, 灭活Taq DNA聚合酶的方法有：(1) PCR产物经酚:氯仿抽提,乙醇沉淀。 (2) 加入10mmol/L的EDTA螯合Mg2+ 。 (3) 99-100℃加热10min.目前已有直接纯化PCR产物的Kit可用。 6. 反应缓冲液：反应缓冲
稀释限制性内切酶时，建议使用稀释缓冲液（A，B，C）。建议临用前稀释且稀释终浓度不要小于1,000 units/ml。目录及说明书中标注了每一种内切酶相应的稀释兼容性。 注：以下稀释液不适用于耐热DNA聚合酶。欲了解稀释耐热DNA聚合酶的相关情况，请参见相应章节。 稀释缓冲液成份： 稀释液A： 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 µg/ml BSA和50% 甘油 (pH 7.4 @ 25℃)。 稀释液B： 300
是一种模拟自然DNA复制过程的体外酶促合成特异性核酸片段技术（亦称无细胞分子克隆技术）。它以待扩增的两条DNA链为模板，由一对人工合成的寡核苷酸作为介导，通过DNA聚合酶促反应，在体外进行特异DNA序列扩增。其过程包括模板变性（denature）、引物退火（annealing）和用DNA聚合酶延伸（clongation）退火引物在内的重复循环系列，使末端被引物5’端限定的特异性片段成指数形式累积。由于在每一循环中合成的引物延伸产物可作为下一循环中的模板，因而每次循环中靶DNA的拷贝数几乎呈
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