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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输
- 保质期:
长期
- 英文名:
Tth DNA Polymerase
- 库存:
793
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Tth DNA聚合酶厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货Tth DNA聚合酶厂家
编号:BTN90501
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:250U
英文名:Tth DNA Polymerase
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下,具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应,但耐热性比Taq酶高,因此对高GC含量模板的PCR 也有较好的效果。本酶基本上没有3´→5´外切酶活性及5´→3´外切酶活性,所以也可用于双脱氧法测序。另外,本酶具有RTase活性,在Mn2+存在的情况下,RTase活性会得到强化。利用该特性,可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应,即一步法RT PCR。(但是,在Mn2+存在时,RT-PCR的准确性不高)此外,本酶与Taq DNA多聚酶一样,PCR产物可通过T载体进行TA克隆。
产品特点:
1.RT-PCR反应的特异性增加:在较高的温度下进行逆转录,增加了引物杂交和延伸的特异性。
2.二级结构减少:在较高的温度下进行逆转录,减少了由于RNA二级结构引起的问题。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| Tth DNA聚合酶(5U/μL) | 50μl |
| 10×Tth Buffer | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
以λDNA为模板,以10×Tth Buffer(+MgCl2)作为缓冲液进行体积为50μL的PCR扩增反应为例
1.按下列组份配制PCR反应液。
| 成分 | 终浓度 | 用量 |
| Tth DNA聚合酶(5U/μL) | 1.25U | 0.25μl |
| 10×Tth Buffer(+MgCl2) | 1× | 5μl |
| dNTP Mixture(各2.5mM) | 各0.2mM | 4μl |
| 模板DNA | 50pg~1μg | 详见下表 |
| 引物1(10μM) | 0.1~1μM | 最多到1μL |
| 引物2(10μM) | 0.1~1μM | 最多到1μL |
| 灭菌蒸馏水 | 加到50μL |
推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量:
| 哺乳动物基因组DNA | 0.5~1μg |
| 酵母基因组DNA | 5~500ng |
| 细菌基因组DNA | 0.5~50ng |
| 质粒DNA | 5~500pg |
| PCR回收片段 | 1~100pg |
2.PCR反应条件
以λDNA为模板,扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下:
注:PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
注意事项:
1.循环测序:该酶为耐热性酶,可通过与PCR 同样的温度条件进行测序反应。由于其高温稳定性好,对于复杂高级结构的模板效果较好。
2.引物:用于耐热性酶测序的引物需比用于非耐酶测序的引物设定更长的时间。采用较短的引物时,可能会出现不能获得条带变淡的情况。
欲了解更多北京现货Tth DNA聚合酶厂家的品牌、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
·昆虫RNA柱式提取试剂盒
编号:BTN81220
英文名称:Insect RNA column Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品(尤其是昆虫样品)中提取总RNA的试剂。
试剂盒特点:
1. 操作简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度高,平均 OD260/280一般都在2.0左右,能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3.适用于各种昆虫组织,每100mg组织能提取到20-30μg 总RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.一站式,提供RNase-free的样品收集管。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 15ml |
| 溶液C | 50ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存(RNA洗脱液最好4℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 将50-300mg昆虫组织放入10-15mL塑料离心管中,加入1mL溶液A,然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织,砚磨完后加入1mL溶液A。
注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿,在振荡器上振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000 rmp离心3~5分钟,两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C,充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000 rmp室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000 rmp室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液,室温12000 rmp离心半分钟,弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液,室温12000 rmp离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
11.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中,加入50-100μl RNA洗脱液,室温放置1-2分钟。
13. 12000 rmp室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。注意:大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段,彼此用*键相连,所以在甲醛变性胶中,没有28S带出现(文献见:Eva C. Winne*(代"b")eck,Craig D. Millar and Guy R. Warman,Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10:1-7)
15. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
北京现货Tth DNA聚合酶厂家关键词:BTN90501,Tth DNA聚合酶,Tth DNA Polymerase
·Bradford法蛋白定量试剂盒
编号:BTN80814
英文名称:Bradford Protein Assay Kit
规格:100mL
Bradford法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一,在酸性条件下,考马斯亮蓝染料能与蛋白质结合形成复合物,其最大吸光值也由465nm转移到595nm,通过颜色的强弱测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford法蛋白检测原理开发的产品。
产品特点:
1.快速,10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2.稳定,加样混匀后2分钟既可测定,1小时内吸光度变化不超过10%。
3.线性范围在 50~1000μg/mL。
4.最小测量体积为1-20μL,最低测量蛋白量为0.5μg。
5.即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
6.有常规和微量两种检测模式。
7.不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。
8.但受略高浓度的表面活性剂影响,各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 100ml |
| BSA标准(2mg/mL) | 1ml |
| 滤纸 | 20张 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,BSA 标准-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、常规检测流程:
此方法在蛋白浓度30-1000μg/mL范围内呈现R2 = 0.996的直线线性回归,可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.制备 1×工作液。溶液A与无菌水按1:4 比例充分混合即为1×工作液(例:4mL溶液A+ 16mL 无菌水 = 20mL 1×工作液)。
2.滤纸过滤。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2 星期。
3.检测:蛋白样品与1×工作液按1:50 比例混合(例:100μl蛋白样品 + 5mL 1×工作液,适用于3mL的比色杯;40μl蛋白样品 + 2mL 1×工作液,适用于1mL的比色杯;20μl蛋白样品 + 1mL 1×工作液,适用于平底透明96孔板)。
4.加样后,充分混匀。
5.室温放置5分钟。
6.检测吸光度。波长设定 = 595nm。
注意事项:
1.不同型号、规格的滤纸,具有不同的孔径,导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸,否则会导致不同的测定结果。
2.检测样品之前,应首先制备蛋白标准曲线。一般可使用BSA。
a)常规检测:建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL
b)微量检测:建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。
3.检测细胞提取物或纯化蛋白样品,应使用相应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
4.用 96孔板测定时,应确保没有气泡,否则会绝对增加吸光度的读数。
5.此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的表面活性剂影响。若SDS高于0.1%,TritonX-100高于0.1%,Tween20,60,80高于0.06%,可取少量样品加水稀释到适当浓度,再行测定。
二、微量检测流程:
此方法在蛋白浓度1~20μg/mL范围内呈现R2=0.992的直线线性回归,可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.蛋白样品与溶液A按4:1比例混合,例:
| 蛋白样品 | 溶液A | 适用性 |
| 400μL | 100μL | 平底透明96孔板 |
| 2mL | 0.5mL | 1mL的比色杯 |
| 4mL | 1mL | 3mL的比色杯 |
2.加样后,充分混匀。
3.室温放置5分钟。
4.检测吸光度。波长设定= 595nm。
注意事项:
1.Bradford蛋白浓度测定的显色反应受许多去污剂的影响。应避免使用SDS,Triton X-100,Tween等溶解蛋白样品。对于难溶解的蛋白样品,可用1MNaOH 溶解和稀释。
2.Bradford蛋白浓度测定的显色反应依赖于蛋白中精*酸残基的数目,因此不同蛋白间测定的差异可能较大。
3.标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
4.由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
5.不像其它一些蛋白浓度测定方法(包括Lowry法),Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二流苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.125%,Triton X-100低于0.125%,Tween 20低于0.06%,可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
北京现货Tth DNA聚合酶厂家关键词:BTN90501,Tth DNA聚合酶,Tth DNA Polymerase
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