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- 百奥莱博
- RFT097-HVQ
- 北京
- 2025年07月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
185
- 英文名：
5×A-plus MasterMix
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻融
- 规格：
20次(200μl)
特别提示：包括5×加A反应液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：5×加A反应液
英文名称：5×A-plus MasterMix
产品货号：RFT097
产品规格：20次(200μl)
本品由pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA片段，如该平末端DNA片段需要和T载体相连接，需要先利用加A反应液在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。本MasterMix提供了加A尾需要的所有成分，可以在20分钟左右完成整个过程。用于平末端片段的加A反应。
使用方法：
1、平末端PCR产物用PCR产物纯化试剂盒(无非特异扩增；货号RTP2202)或凝胶回收试剂盒纯化(有非特异扩增，货号RTP2201)回收。
2、纯化后的平末端DNA片段按照以下反应体系加A，全量为50μl：
平末端DNA片段——————0.5～5μg
5×加A反应液-——————10μl
ddH2O——————————up to 50μl
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。
我公司销售的5×加A反应液优惠促销，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
。 （7）吸取上清，为核蛋白提取物。 （8）马上进行EMSA实验。 探针制备： 用γ-32P-ATP及T4多核苷酸激酶对合成的转录因子结合和突变型寡核苷酸的两条互补链分别进行末端标记。20 µl反应总体积中，加寡核苷酸10 pmol，10×T4多聚核苷酸激酶缓冲液2µl，γ-32P-ATP 3 pmol，T4多核苷酸激酶10 u，37 ℃反应45 min，再置于68 ℃ 10 min灭活。在离心管中加入退火反应液60 µl，互补配对的两条链的标记产物各20 µl，于95 ℃变性5min，缓慢降温
检测。 5）Genomic DNA 与 Genomewalker Adaptor 连接 (1)于0.5ml 离心管中加入 (2)16℃过夜 (3)70℃保育5min (4)加入TE 72 μl (TE 10/1 pH7.5) (5)轻弹5-10s6）PCR (1)1st PCR ① 配制PCR反应液 ② 反应条件: 94℃ 25s，72℃ 3min ×7；94℃ 25s，67℃ 3min ×32；67℃7min。 (2)2nd PCR 1)取1 μl 1st PCR 产物49 μl ddH
1.0ml三氯乙酸混匀作对照。然后将所有试管置真空干燥器中接真空泵抽气，反复几次直至叶片沉在管底。将各试管置30℃下于黑暗处保温30min，分别向处理管加1.0ml三氯乙酸，摇匀终止酶活性。 （3）比色 将各试管静置2min，吸取上清液2ml加入另一组试管，以对照管做参比，按标准曲线做法进行显色测定，并计算酶活性（Nμg·g﹣1·h﹣1）。 式中 C—反应液催化产生的亚硝态氮总量（μg）； V1—提取酶液时加入的缓冲液体积（ml）； V2—酶反应时加入的粗酶液体积（ml）； W—样品
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