WB封闭液(脱脂奶粉)北京厂家

WB的疑问

wx275411643 麻烦哪位高手帮助解答一下我现在做WB遇到的情况，我买的抗体说明书上写的目的条带分子量和实际曝光出来的不一样，Marker肯定没问题了，是国内公司的抗体，问过公司，他们说是蛋白被修饰了，所以会大点。我做的结果比说明书上的大了大概10KD（书上说39KD），不知道公司的解释能不能接受？抗体是多克隆的。就怕他们用别的抗体冒充我要的。 zhe992000 看看你的蛋白质的分子量有没有问题？好多时候，蛋白在翻译

Akt的WB问题

）in TBST 室温一个小时，一抗稀释在5%BSA in TBST 中（而非5%脱脂牛奶）4度过夜，这样我相信背景会降低，提高信噪比。 补充一些, 理论上, 用WB测蛋白的磷酸化的时候,常规是BSA比牛奶更好. 因为牛奶中含有casein, 会非特异性的和测磷酸化的抗体结合,导致背景着色提高.AKT的磷酸化,我自己也用过BSA 也用过脱脂奶粉.感觉没多大区别. 磷酸化如果测不出来的时候 1. 可能是这个组织或细胞本身的磷酸化很低. 但是你用的那几个脏器,比如肝肺 都能测

14kd 蛋白wb的有关问题

liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。