cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)

特别提示：包括cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)
英文名称：BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
产品货号：WE0133
产品规格：100次

  本试剂盒是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制gDNA Eraser的组分，经过 gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型高效反转录酶BalbScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA第一链合成的效率和产量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。如逆转录产物cDNA用于下游荧光定量检测，可在42℃，15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
gDNA Eraser	12.5μl	50μl
10×gDNA Eraser Buffer	30μl	120μl
BalbScript，200 U/μl	25μl	100μl
5×ScriptRT Buffer	120μl	500μl
Primer Mix	30μl	120μl
RNase-Free Water	1ml	2×1ml

产品特点
1、快速去除基因组：含有去除基因组DNA 的gDNA Eraser，只需2min即可除去基因组DNA。
2、快速逆转录：15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA第一链合成。
3、灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4、高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于-20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大，10μl反应体系可zuì大使用1μg总RNA。
4、Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成， 也可根据实验需要选用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号为WE0223。
6、对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤：
将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

一、去除基因组DNA反应
1、根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性，先按反应数+2的量配制预混体系，然后再分装到每个反应管中，zuì后加入RNA样品。

试剂	10μl反应体系
10×gDNA Eraser Buffer	1μl
gDNA Eraser	0.5μl
RNA Template	10 pg-1μg
RNase-Free Water	up to 10μl

注意：如果总RNA量大于1μg，请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)，该产品货号为WE0223。

2、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、42℃孵育2分钟(室温反应时，可以延长到30分钟)。
4、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

二、逆转录反应

1、根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的准确性，先按数+2的量配制成预混溶液，然后再分装 10μl到每个反应管中，取配制的预混液10μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
 

试剂	20μl反应体系
步骤1反应液	10μl
BalbScript，200 U/μl	1μl
Primer Mix	1μl
5×ScriptRT Buffer	4μl
RNase-Free Water	4μl

注意：可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。

2、混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、cDNA合成反应条件：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
4、反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续PCR或荧光定量PCR，如果需要长时间保存，请置于-20℃。
注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

除了cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA),，我公司还供应以下相关产品：


BTN130609 一步式RT-PCR Mix 1mL
YT391 dNTP混合溶液(25mM) 250μl
WE0113 BaHF高保真DNA聚合酶 500U|2500U
WE0120 血液直接PCR扩增试剂盒 50μl×40次|50μl×200次
WE0141 快速实时荧光定量PCR预混体系 5ml
WE0160 超纯dNTP混合液(10 mM) 1ml|5ml
ALH223 Pfu DNA聚合酶 500U|3000U
RFT097 5×加A反应液 20次(200μl)
RFT103 高效高保真DNA聚合酶 500U(100μl)|5×500U(5×100μl)
SY0027 改进型DNA聚合酶 250U
SY0028 2×PCR Plus Master Mix(含染料) 5×1ml
SY0042 脱氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)(dCTP) 400ul
SY0292 第一链cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper) 200T
JN0016 Pfu DNA聚合酶 250U|250U×5
JN0031 2×Pfu PCR MasterMix 1ml×5
JN0056 dUTPase(热稳定) 200U×5
QN0969 2×Pfu PCR MasterMix (含染料) 1ml|5ml
QN0973 2×Taq PCR MasterMix (不含染料) 1ml|5*1ml
HQF09 组织-细胞免抽提直接PCR试剂盒 100次/400次
HQF11 全血免抽提直接PCR试剂盒 100次/500次/1000次
MT0024 HL Taq DNA聚合酶(高保真,长片段) 250U|1000U