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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
469
- 英文名:
SABC(Goat IgG)-FITC Kit
- 保质期:
一周
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
- 规格:
100T-200T
特别提示:包括SABC免疫组化试剂盒(山羊IgG)(FITC荧光显色)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:SABC免疫组化试剂盒(山羊IgG)(FITC荧光显色)
英文名称:SABC(Goat IgG)-FITC Kit
产品货号:QN1224
产品规格:100T-200T
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG来源的免疫组化实验.,FITC荧光检测。
试剂盒组份:
封闭液(5% BSA)-——————10ml
Bio-兔抗山羊IgG浓缩液———100ul
SABC-FITC浓缩液——————100ul
稀释液-——————————30ml
抗荧光衰减封片剂-—————10ml
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,SABC大约可形成一百个左右的FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M 柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.4)洗涤1-2次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃,10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
3. 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37℃ 孵育1小时左右或20℃ 2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5. 根据使用量,用稀释液将Bio-兔抗山羊IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-兔抗山羊IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-兔抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液,20-37℃孵育30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Trxiton X-100室温孵育20分钟, PBS漂洗两次,接上述第3步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,再接上述第2步。
注意事项:如果背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
我公司销售的SABC免疫组化试剂盒(山羊IgG)(FITC荧光显色),质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验说明:这是我今年做免疫组化的一点体会,奉献给大家。如有不正确的地方,敬请指教。同时,这也是我应付《免疫组化》的一份作业,老师给了我85分。斑竹呀,如果觉得有点用,就请鼓励一下,加点分吧!:D:D:D应用SABC法进行免疫组化染色的体会SABC(Strept Actividin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。由于该方法中的链霉亲和素的等电点接近中性(pH=6.0-6.5),对组织和细胞的吸附性特别低,因而具有较低的背景。它的步骤
FITC荧光二抗?――EarthOx新型DyLight 488绿色荧光
的价格比常规二抗 只高20%左右,但是Dylight的效价通常是常规荧光二抗的2-4倍左右,因此就最终的性价比,Dylight更胜一筹。举例来说,EarthOx的 FITC标记的山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E031210),100μl和500μl报价分别是¥160和¥640;而相应的EarthOx的 Dylight 488标记的山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E032210),100μl和500μl报价分别是¥200和¥800,但是在具体使用时,比如免疫荧光实验,其推荐稀释比率分别为1:100
的3%H2O2,室温封闭5~10分钟,蒸馏水洗3次。4)抗原修复。5)PBS洗5分钟。6)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。7)滴加Ⅰ抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时(4℃过夜后在37℃复温45分钟)。8)PBS洗三次每次2分钟。9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分钟。10)PBC洗3次每次2分钟。11)滴加试剂SABC,20℃~37℃20分钟。12)PBS洗4次每次5分钟。13)DAB显色:DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色(镜下掌握显色程度)。14)蒸馏水洗。苏木
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