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- 百奥莱博
- JN0187-IAS
- 北京
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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56
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
冷藏
- 规格：
100ml|500ml
特别提示：包括酵母蛋白提取试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：酵母蛋白提取试剂
产品货号：JN0187
产品规格：100ml|500ml
酵母细胞由于其复杂的细胞壁结构对其细胞膜提供了非常强的保护，通常采用强机械方法破碎，如玻璃珠研磨破碎，而且破碎效率低，并且可能引起蛋白的变性。本产品采用温和的表面活性剂配方，室温孵育20分钟即可完成细胞破碎，抽提的可溶性蛋白保持了原有的生物学活性，可用下一步的分析实验或下游纯化。本产品适用于酿酒酵母、裂殖酵母和枯草杆菌 的革兰氏阳性细菌等微生物表达的蛋白抽提。
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文献和实验到一预冷的玻璃管中，再加入玻璃珠33ul（425-600um）。冰上操作，涡流10min，但不包括样品的预冷时间。 6 回收玻璃珠，并尽可能取上清到另一预冷的玻璃管中。 7 40ul的抽提buffer，同上涡流。 8离心后分离上清（回收玻璃珠）。 9液氮快速冷冻，-70℃储存。 10 提取的蛋白量通常约10-20mg/ml, 2-5ul用于实验。
问：请问各位高手，我想让酵母蛋白酶Ａ失活，决定采用ＰＣＲ进行ＤＮＡ序列的突变，此法行的通吗？可有前人研究过？ 答：国外有了"蛋白酶缺失"的用于重组蛋白表达的菌株。国内也许也有，小龙对于上游不大懂，不知道自己构建蛋白酶缺失的酵母菌是否有技术上的难度。参见一篇综述《生命的化学》2003 年23 卷1 期CHEMISTRY OF L IFE 2003，23(1) 酵母表达系统及其应用研究。 假如只是为了降低重组蛋白表达时被水解的可能，在提取液中加入蛋白酶抑制剂如PMSF可以部分解决。
实验原理 酵母细胞富含蛋白质和核酸。用稀碱液（0.2% 的氢氧化钠）处理酵母使细胞裂解，离心收集上清液，得到酵母核蛋白抽提液。用盐酸调节抽提液 pH 至 3.0 （核蛋白的等电点），核蛋白溶解度下降大量沉出，离心收集沉淀物为酵母蛋白质粗制品。 酵母核蛋白是一种结合蛋白质，是蛋白质与核酸的复合物。酵母核酸主要是 RNA （含量为干菌体的 2.67 ％-10.0 ％）， DNA 含量较少，仅为 0.03％ -0.516％。如设法使酵母
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