DNS试剂(Ghose法)

蛋白质DNS分析法DNS—Cl(膜层析技术)

一、实验目的 1.掌握DNS 分析法测定氨基酸的原理与方法。 2.进一步熟悉薄膜层析的操作。 二、实验原理 荧光试剂二甲氨基萘磺酰氯即DNS—Cl(Dansyl—Cl)，能与所有氨基酸的氨基结合，生成荧光物质DNS—氨基酸。DNS—Cl 也能与蛋白质或多肽的游离氨基结合，生成DNS—蛋白质或DNS—肽，经酸水解后释放出DNS—氨基酸。 各种DNS—氨基酸与聚酰胺薄膜形成氢键的能力

Folin—酚试剂法（Lowry法）

实验原理   这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难，近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰

酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法

  　　1．原理 用酰化剂3--（4-羟苯基）丙酸―N琥珀酰胺酯（Bolton―Hunter试剂）做连接试剂，将125 I标记在羟苯基的2，5位置上，再将琥珀酰胺酯水解，通过一个酰氨键将3--（4―羟基―5―125 I―苯基）接在蛋白或多肽的末端氨基上。 　　2．方法 125 I―Bolton―Hunter试剂可用氯胺T法自行制备，出已有该试剂的苯溶液作为商品出售。使用时取一定量的标记酯（μmol 蛋白用3～5μmol标记酯），用氮气吹除苯，投入欲标记蛋白5～10μg