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SDS-PAGE蛋白加样缓冲液
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—20℃,12个月
雷根生物
5×1ml/10ml/10ml
SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(5×)产品简介:SDS-PAGE蛋白上样缓冲液即SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。Leagene SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)常用于SDS-PAGE蛋白样品的上样,含少量DTT,但不含有毒物质β-巯基乙醇。
操作步骤(仅供参考):
在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(5×,含DTT),水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。使用完毕后应置于-20℃保存。
取适量的蛋白样品和SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)按4:1混合,充分混匀。如40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液 (5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。
95℃水浴加热5~10min,以充分变性蛋白。
冷却到室温后,经10000~14000rpm离心2~5min,取上清直接上样电泳。
通常电泳至蓝色染料到达PAGE胶的底部附近即可停止。
注意事项:
Leagene SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)中含少量DTT,有轻微刺激性气味。
SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)必须完全溶解后再使用。建议根据使用量和频率分装冻存,应避免反复冻融。
本产品用于蛋白变性时,建议95ºC水浴或PCR仪加热5分钟,温度过高(如100ºC)或时间过长(如超过15分钟),有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
本产品含有溴酚蓝指示剂,pH受温度影响,颜色可能有所不同;低温冻存条件下,呈深棕色~深蓝色凝固状态,不影响正常使用。
本产品稀释至1X后可以直接用于细胞或组织样品的裂解。
加热前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体,通常在本上样缓冲液内95℃水浴加热8~10分钟后可使该粘稠的半透明状物体消失,便于后续的上样操作。如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组DNA含量较高,加热5~10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体,此时需要再加热5-10分钟或者加入适量1X的蛋白上样缓冲液后再加热3~5分钟。充分加热后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放,同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作了。适当超声或使用1ml注射器反复抽吸也可以打断基因组DNA从而使粘稠感消失。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
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