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- 百奥莱博
- WE0315-GUY
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
254
- 英文名：
Mouse HRP Kit(DAB)
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
2～8℃
- 规格：
3ml
特别提示：包括免疫组化试剂盒(鼠源一抗)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：免疫组化试剂盒(鼠源一抗)
英文名称：Mouse HRP Kit(DAB)
产品货号：WE0315
产品规格：3ml
本试剂盒根据生物素与链霉亲和素具有强亲和力的原理设计。在鼠源的一抗与相应的靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素标记羊抗鼠二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记过氧化物酶(HRP)的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。鼠Streptavidin-HRP试剂盒适合与百奥莱博即用型或浓缩型抗体配套使用。
试剂盒组成：
| 组份 | 3ml |
| Solution A(Endogenous Peroxydase Enzymes Blocking Buffer，White Solution) | 3ml |
| Solution B(Normal Goat Serum For Blocking，White Solution) | 3ml |
| Solution C(Goat anti-Mouse IgG，Biotin，Ready to Use，Yellow Solution) | 3ml |
| Solution D(Streptavidin-HRP，Ready to Use，Red Solution) | 3ml |
| DAB-A(20×) | 250μl |
| DAB-B(1×) | 5ml |
注意事项：
1、本试剂盒仅适用于一抗为的鼠源抗体的IHC实验。
2、以每张切片加入1滴(约50μl)计算，3ml可做60张切片，18ml可做360张切片。
3、对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时zuì好用内源性生物素阻断剂进行封闭。
4、DAB工作液现配现用，配制好的工作液2～8℃避光1小时内有效。
5、实验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证完全覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。
6、为获得zuì佳实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。
7、DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体治疗。
操作步骤：
1、常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。
1)组织切片或细胞爬片染色前处理：
a. 石蜡切片
脱蜡水化：60ºC烤片1小时，二甲běn脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇－无水乙醇－95%－85%－75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟，0.01 M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2)石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制：1 L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100×)(Cat#：WE0318)，混匀即可。
修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中(必需没过组织)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次，每次3分钟。
2、滴加适量Solution A白色溶液，即内源性过氧化物酶封闭液室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
3、滴加适量Solution B白色溶液，即封闭用正常羊血清工作液，室温孵育10分钟，甩干。
4、滴加适量一抗工作液(商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体)，按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。
5、滴加适量Solution C黄色溶液，即生物素标记羊抗鼠二抗工作液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
6、滴加适量Solution D红色溶液，即HRP标记的链霉亲和素，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
7、DAB显色工作液配制：根据需要量，将DAB-A和DAB-B以1：19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升试剂B中滴加1滴(约50μl)试剂A，混匀即可。
8、显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到zuì佳显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。
储存条件：2～8℃
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文献和实验位。 IF（免疫荧光检测）是采用荧光素标记物作为探针，形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，受激发光的照射后发出一定波长的荧光，从而对细胞、组织中的抗原进行定位或定量。 表 1 IHC/ICC与IF特点对比 IHC/ICC 与 IF 染色中使用的抗体主要为一抗与二抗，根据是否选用二抗以及二抗标记物类型可形成多种不同的检测系统。信号放大是免疫组化实验中的重要步骤，信号放大可以使目标蛋白质的信号从微弱到明显，从而更容易被观察和定量。现有的信号放大技术多为链霉亲和素-生物素法，该方法基于链酶亲和
。 实验类型：大多数只标明用于WB、IP、IHC、IF、ChIP的抗体都不适用于流式实验(FC,flow cytometry)。选择标明用于FC实验的抗体，并有引用文献和实验数据图。 克隆号：有一些标记物有多个克隆号，选择文献报道中使用多，荧光标记种类多的克隆号。 厂家和批号：不同厂家或同一厂家生产的不同批号的相同荧光的相同标记物的抗体，荧光染料的强度可能有少许差别，不建议一次实验混合使用。 2、流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。 在流式实验过程中，直标抗体一抗上连接有荧光染料，间标
米宝 这俩天做实验，极其郁闷。我做的总AKt和pAkt,大鼠脑组织，第一次跑总AKT的时候，我觉得可能是因为蛋白是提取的浓度比较好吧，出来了一条浓浓的条带，三组总AKt都出了，接下来做pAkt,就出了一个带，效果挺明显的。后来再做pAkt的时候，跑了4张膜，显影的时候，太干净了，上面什么都没有，甚至连个杂带，斑点 都没！实验是在实验员的领导下完成的，技术上基本没什么纰漏，查阅本版面有关这问题方面的介绍，有的解释说pakt降解了！一抗是用的Phospho-Akt
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