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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
377
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻融
- 规格:
500μl|5×500μl
特别提示:包括2×pfu PCR MasterMix在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:2×pfu PCR MasterMix
产品货号:RFT093
产品规格:500μl|5×500μl
本品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可zuì大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通过平滑末端克隆法进行克隆。以50μl PCR反应体系为例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20次 50μl PCR反应。
质量控制:以λDNA为模板,可以很好扩增5kb的DNA片段;以水稻基因组为模板,可以很好扩增3.2kb的DNA片段。
使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
| 50μl反应体系 | 终浓度 | |
| 2×MasterMix | 25μl | 1× |
| 上游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8μM |
| 下游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8μM |
| 模板 | ×μl | 10pg-1μg |
| 水 | 补至50μl |
3. 快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 初始变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
| 退火 | Tm-5℃* | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 0.5kb/min | |
| zuì后延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。
6、电泳检测。
注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上样;不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
我公司销售的2×pfu PCR MasterMix北京现货,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验请教:高保真酶 关于taq plus 求教Pfu酶作PCR的要求 Pfu扩增求救!!!! 请问哪一种高保真DNA聚合酶比较好呢? Pfu DNA 聚合酶的问题 pfu的扩增条件! 关于高保真酶问题? 求助:高保真酶 关于高保真酶 关于高保真的酶 pfu高保真酶怎么那么难用? Pfu DNA聚合酶------常见问题 请教如何做病毒的 pfu 请教Pfu扩增2kb片段 高保真酶咋还不如普通的Taq酶? 请教关于高保真酶问题 哪个公司
μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer ( 10 μM 1-5 μL 下游 Primer ( 10 μM ) 1-5 μL 模板 lamid DNA ~ 50 ng genomic DNA ~ 1000 ng cDNA ~ 500 ng 粗提液 ~ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例: 一、plasmid DNA 扩增 1.提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100,250,500
荷以加速引物和 DNA 模板复合物的形成。 通常情况下 Mg2+以 MgCl2 形式提供,但对于一些诸如 Pfu DNA聚合酶,Mg2+是以 MgSO4 形式提供,硫酸根在一些情况下可增强扩增能力。通常 Mg2+ 浓度在1-4 mM 范围,低 Mg2+ 浓度可导致无PCR产物或产物减少,高 Mg2+ 浓度可导致非特异性 PCR 产物生成。 【缓冲液】 PCR 反应缓冲液可为 DNA 聚合酶提供合适的化学环境。缓冲液的 PH 通常在 8.0-9.5 之间,一般是通过 Tris-HCl 来调节
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