BuChE-IN-TM-10,2313524-95-5

PCR 反应体系的循环参数

的退火温度要比扩增引物的 Tm 值低 5℃。增加退火温度会增加引物的识别，同时可降低引物 3 端核苷酸的错误延伸。因此，提高退火温度，特别是在前几个循环中，会增加扩增的特异性。而且为了在循环开始获得最高的特异性，应在第一次变性之后，引物退火之前加入 Taq DNA 聚合酶。复性时间一般为 30～60s。 3、延伸温度和时间： 引物延伸温度一般为 72℃，延伸的时间决定于扩增模板的长度，小于 1kb 的片段一般 1～2min，而 10kb 的片段可能需要 15min 或更长时间。不合适的延伸温度不仅会

实时荧光Taqman 探针设计的几个要点

上还连接有MGB (Minor Groove Binder)修饰基团，可以将探针的Tm值提高10°C左右。因此为了获得同样的Tm值，MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短，既降低了合成成本，也使得探针设计的成功率大为提高——因为在模板的DNA碱基组成不理想的情况下，短的探针比长的更容易设计。实验证明，TaqMan MGB探针对于富含A/T的模板可以区分得更为理想。 Taqman探针法已经得到广泛使用，不过有人认为这种技术利用了Taq酶5`—3`外切酶活性，一般试剂厂家只给Taq

Taq酶PCR实验方法介绍

cycle and in a poor yield of PCR product. The initial denaturation should be performed over an interval of 1-3min at 95°C if the GC content is 50% or less. This interval should be extended up to 10min for GC-rich templates. If the initial denaturation