血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-1ml)

特别提示：包括血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-1ml)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-1ml)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from blood（0.1-1ml)
产品货号：WH0012
产品规格：50次|200次

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

产品特点：
·样本适用广泛：可从抗凝血（EDTA，肝素等）、白膜层和血凝块等样品中直接提取基因组DNA；
·高质量：独特的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求；
·快速无毒：采用硅胶膜吸附原理，无需酚/lǜ仿，1h内即可完成实验。
·应用范围广：适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等下有实验。

提取实例：

用本试剂盒提取不同体积血液基因组，1%琼脂糖凝胶，6V/cm，电泳20min，Marker为λDNA/Hind III。

提取得率：

材料	提取量	DNA得量
哺乳动物全血	100μl-1ml	3-30μg
禽类、两栖类全血	5-20 μl	5-40 μg

试剂盒组成：

组分	50T	200T
细胞裂解液CL	60 ml	250 ml
缓冲液GS	15 ml	50 ml
缓冲液GB	15 ml	50 ml
缓冲液GD	13 ml	52 ml
漂洗液PW	15 ml	50 ml
洗脱缓冲液TB	15 ml	60ml
Proteinase K	1ml	4×1ml
吸附柱CB3	50个	200个
收集管（2 ml)	50个	200个
1.5 ml离心管	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

自备试剂：RNase A（100mg/ml) （目录号：WH0217)，异丙chún，乙醇

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小、提取量下降。
2．若缓冲液GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
3．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

使用方法：
使用前先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理血液材料（本产品适用于处理已添加抗凝剂的100μl-1ml血液样品）：
  a.当血液样品体积小于200 μl时，可加缓冲液GS补足体积至200 μl，再进行下一步实验（如血液样品体积为200 μl，可直接进行下一步实验，不需加入GS)。
  b.当血液样品体积超过200 μl时，需用细胞裂解液CL处理，具体步骤如下：
  在样品中加入1-2.5倍体积的细胞裂解液CL，颠倒混匀，10000rpm（~11500×g )离心1 min，吸去上清，留下细胞核沉淀（如果裂解不彻底，可重复以上步骤一次），向离心收集到的细胞核沉淀中加200 μl缓冲液GS，振荡至彻底混匀。
  c.如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20 μl，可加缓冲液GS补足200 μl后进行下面的裂解步骤。
  注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100mg/ml）溶液（目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。
2．加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
3．加200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，56℃放置10min，其间颠倒混匀数次，溶液应变清亮（如溶液未彻底变清亮，请延长裂解时间至溶液清亮为止）。
  注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般37℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200 μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
4．加200 μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
5．将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱CB3放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
6．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8．重复操作步骤7。
9．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10．将吸附柱CB3转入1.5 ml离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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