RNA/DNA分离提取试剂盒供应

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北京百奥莱博专业生产供应RNA/DNA分离提取试剂盒供应，我公司销售全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：RNA/DNA分离提取试剂盒供应
英文名：Tissue Cells DNA/RNA/microRNA Extraction & Isolation Kit
规格：50次
产地：国产|进口
编号：ALH069
品牌：百奥莱博
本试剂盒适用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和包括miRNA的RNA(如购买额外miRNA吸附柱子和配套溶液，还可以将同一个样品的总RNA和miRNA分离并提取，富集miRNA。）。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶，然后裂解混合物RNA/miRNA/ DNA同时通过一个基因组DNA吸附柱，基因组DNA被吸附而miRNA/RNA穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的miRNA/RNA用乙醇调节结合条件后，miRNA/RNA在高离序盐状态下选择性吸附于miRNA/RNA吸附柱上， 再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的miRNA/RNA。无苯酚、氯*(代"仿")DNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的miRNA/RNA/基因组DNA纯度高，互不干扰。得到的miRNA/RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。

产品特点：
1. 完全不使用有毒的苯酚，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 快速，简捷，单个样品miRNA/RNA/基因组DNA分离操作一般可在40分钟内完成。
3. 独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的miRNA/RNA不需要DNase消化可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4. 多次柱漂洗确保miRNA/RNA/基因组DNA高纯度，可直接用于下游各种实验。

产品组分：
裂解液RLT Plus————50ml
Wash Solution 1————12ml
Wash Solution 2/3————10ml
RNase-free H2O—————10ml
抑制物去除液——————25ml
漂洗液—————————15ml
洗脱缓冲液———————10ml
基因组DNA吸附柱和收集管————50套
RNA吸附柱和收集管————50套

储存条件：室温，有效期12个月。

注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过3-4x106，组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus 、抑制物去除液IR、Wash solution 1、Wash solution 2/3中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 该试剂盒如需要用于植物样品尤其是多糖多酚次级代谢产物丰富的困难样品的DNA/miRNA/RNA提取，请咨询技术人员，可能需要用到其它试剂。
5. 如购买额外miRNA吸附柱子和配套溶液，还可以将同一个样品的总RNA和miRNA分离并提取，富集miRNA。请咨询我们。
6. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（ DNase 消化也无法做到100% 无残留）， 本试剂盒，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 分离清除技术，绝大多数DNA 已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA 中的连接区，这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

操作步骤：

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
 第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶、漂洗液WB 和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 组织培养细胞
a. 收集<107 悬浮细胞到一个1.5ml 离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直接裂解，细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。
b. 13000rpm 离心10 秒（或者300xg 离心5 分钟），使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。
c. 轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬， 加350μl（ <5×10^6细胞） 或600μl（5x106-1×10^7细胞）裂解液RLT Plus，吹打混匀后用手剧烈振荡20 秒充分裂解。
d. 匀浆：（处理细胞量极少时<1×10^5一般不需要，涡旋振荡一分钟匀浆）。用带钝针头的一次性1 ml(配0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物5-10 次或直到得到满
意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒) ，可以剪切DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高产量。
e. 将裂解混合物或匀浆混合物全部加到DNA 吸附柱上（吸附柱放在收集管内）。
f. 接操作步骤项下3。

2. 动物组织（例如鼠肝脑）
a. 电动匀浆：新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,加入350μl(<20mg 组织)或者600μl(20-30mg 组织)的裂解液RLT Plus 后电动彻底匀浆20-40 秒。
b. 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(20mg/30mg)转入装有350μl/600μl 组织裂解液RLT Plus 的1.5ml 离心管中， 用手剧烈振荡20秒，充分裂解。用带钝针头的一次性1 ml(配0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物10次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒) ，可以剪切DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高产量。
c. 将匀浆后裂解物13，000rpm 离心3 分钟,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物，将裂解物上清全部加到DNA 吸附柱上（吸附柱放在收集管内）。
d. 接操作步骤项下3。

3. 13000rpm 离心30 秒，保留滤过液（miRNA/RNA 在滤过液中）。DNA 吸附柱子（膜上吸附有基因组DNA）短时间可存放4℃度备用。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

以下步骤为提取RNA 步骤：
4. 用微量移液器较精确估计滤过液体积（350μl 或者600μl 左右，滤过时候损失体积应该减去），加入1.25 倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
5. 立刻将混合物(每次小于700μl，多可以分两次加入)加入一个RNA 吸附柱 中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm 离心30 秒，弃掉废液。装滤过液体和乙醇混合物的DNA 吸附柱的收集管（混合物转入RNA 吸附柱后剩下的空收集管）需要保留，将DNA 吸附柱放回此收集管保留在4℃，备用于步骤11 开始的基因组DNA提取。
6. 加700μl Wash Solution 1（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
7. 加入500μl Wash Solution 2/3（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm 离心30 秒，弃掉废液。加入500μl Wash Solution 2/3，重复一遍。
8. 将吸附柱 放回空收集管中，13000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9. 取出吸附柱，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
10. 如得到的RNA 可以立即用于下游反应或者尽快置于低温保存。

以下步骤为提取DNA 步骤：
11. 在步骤3 的DNA 吸附柱上加入500μl 抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30 秒，弃废液。
12. 加入700μl 漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30 秒，弃掉废液。
13. 加入500μl 漂洗液WB，12,000rpm 离心30 秒，弃掉废液。
14. 将DNA 吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
15. 取出DNA 吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl 洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1 分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2 分钟，12,000rpm 离心1 分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA 洗脱效率，减少DNA 产量。
16. DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

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·植物基因组DNA快速提取试剂盒(CTAB法)
编号：ALH144
英文名称：Plant genomic DNA Extraction Kit(CTAB)
规格：50次|100次|200次
本试剂盒采用改进的经典CTAB植物DNA抽提液（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，氯*(代"仿")抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质（根据需要，上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA，进一步去除其它各种杂质），然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份（100次）：
裂解液PL————————80 ml
结合液PQ————————30ml
抑制物去除液IR—————50ml
漂洗液WB————————25ml
洗脱缓冲液EB——————15ml
吸附柱AC————————100个
收集管（2ml）—————100个

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3. 需要自备氯*(代"仿")/异戊醇（体积比24：1混合）、无水乙醇和β-巯基乙醇。
4. 结合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. 不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。
6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
7. 本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积，如果样品DNA含量低或者产量低，需要扩大提取量，还需要另外购买溶液。

储存条件：室温，有效期12个月。

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