- 询价
- ATCC/DSMZ/CCTCC/promocell/ExPASy/JCRB/cellbiologics/KCLB/国家细胞资源中心/中科院等
- 国内外引进
- CQH037
- 2025年08月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
SPC-A-1
- 库存：
999
- 组织来源：
人
- 物种来源：
人
- 细胞形态：
贴壁
- 运输方式：
干冰
- 生长状态：
上皮细胞样
- 规格：
株
货号 H037
种属 人
细胞来源 从ATCC/中科院/协和医院等地引进
生长特性 贴壁 上皮样
培养条件
培养基：90%DMEM+10%FBS
温度：37℃ 气相：95%空气，5%二氧化碳
传代 1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；
3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
保存 冻存条件：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO (备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)
保存条件：液氮存储
供应限制 经供研究之用
常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）
3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；
如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
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文献和实验都是贴壁细胞，在消化传代过程中，步骤如下：倒尽旧的培养液－＞用无血清的培养基清洗一两次－＞加入一定量的胰酶，置于37度培养箱中5--10分钟，使细胞悬浮－＞显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞加入一定量的含血清的新培养液，以终止胰酶作用－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新的培养瓶中－＞最后再补充加入一定量新的培养液。注意： 1、吹细胞时尽量多吹边角儿，此处细胞生长的多。2、吸出细胞前要混匀，可以剧烈震荡培养瓶。3、我们用的是DMEM
littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库，但我不是这个方面科班出身，好多地方还不是很明白，想请教师兄师姐的经验，应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗？非常感谢！！ neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵 littleyan0418
所需的D-HANK'S液和胰酶和用1640配置的适当浓度小牛血清最好都放在37度预热十分钟左右，让它们和细胞生长环境的温度是一样的。这样能达到既对细胞没有外来刺激的作用又能达到反应的最佳条件。我用的是小培养瓶，方法是:先把旧的培养液倒掉，用D-HANK'S大约3ml洗一次，加浓度为0.1%的胰酶进行消化，添加量只要能均匀的覆盖培养瓶底，大约要1.5ml，最好把瓶盖旋紧放到37度培养箱里培养3-5分钟，在显微镜下观察细胞收缩，变圆，加入3ml的10%的血清终止消化。小心仔细的吹打培养瓶底使细胞
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