- ¥900 - 2860
- 泽叶生物
- ZY1022
- 中国/上海
- 2025年12月10日
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大量
- 英文名：
JM108 Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
JM108 Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格（CAT#: ZY1022）
JM108： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
F- endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+)
产品说明
JM108来源于JM106菌株，最初是作为黏粒文库的宿主被改造而成。 JM108菌株缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。JM108菌株最大的特点是扩繁质粒产量大，纯度高，且质量稳定，特别是超螺旋质粒比例较高，超螺旋质粒所占比例一般>90%(gyrA96突变型说明JM108菌株的DNA-gyrase 基因被突变，导致拓扑异构酶Ⅱ的功能受影响，增加了超螺旋质粒的比例)，非常适合后续的动物细胞转染实验（超螺旋质粒可提高细胞转染的效率）。此外该菌株具有萘啶酸抗性。泽叶生物开发的JM108感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>0.5×109 cfu/μg DNA。
操作方法
1. JM108感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏70分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少13小时。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验7 的缓冲液来洗脱；洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响，例如感受态细胞状态，转化方式及操作（电转或热激），质粒用量，质粒质量等等。从感受态角度优化，可以考虑感受态本身的状态，比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低，此外热激条件也会影响感受态转化效率，建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化，可以进一步确认质粒用量，质粒浓度，质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
的菌株在30oC而不是在37oC生长，更有利于连接。作简单的亚克隆连接实验，亚克隆转化效率的感受态细胞就可满足克隆需要，更高转化效率的感受态细胞可用于作比较困难的克隆实验。为提高获得目的克隆的机会，应用尽可能高转化效率的感受态细胞（>108克隆/μg DNA）。 (2)大肠杆菌基因型 hsdR 有利于非甲基化DNA（如PCR扩增产物）的有效转化。 mcrA 有利于甲基化DNA（如基因组）的有效转化。 acZΔM15 用于蓝白斑筛选。 endA1 无Endonuclease I 酶活性，有利
1、存放：超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入–80℃冰箱的底部。一定不要用液氮来存感受态细胞。1) 存放条件：超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感，因此必须存放在–80℃冰箱的底部。即使是将细胞从一个冰箱转移到另一个冰箱也会导致转化效率的损失。采用BD Falcon 的14ml聚丙烯圆底试管：在转化实验中使用圆底14-ml BD Falcon聚丙烯试管（货号 #352059）也是关键之一。一般的试管容易被b-巯基乙醇降解。而极为重要的热激步骤的操作也是根据这种型号的试管优化
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