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LX-2 人肝星状细胞

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  • ATCC
  • 2025年07月16日
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    LX-2 人肝星状细胞 ATCC

     

    生物 Homo sapiens,人类
    组织 肝/左叶
    细胞类型 用SV40大T抗原转化的上皮细胞
    产品格式 冻结的
    形态学 上皮
    文化属性 追随者
    年龄 成人
    应用

    这些永生化的人肝细胞构成了药物毒理学研究的体外模型,并用于研究人肝细胞癌的病因和发病机理。

     

    储藏条件 液氮气相
    核型 二倍体附近
    图片 ATCC CRL-2706细胞显微照片
    求导

    里边反THLE-2(ATCC CRL-10149和THLE-3细胞系购自原代正常肝细胞感染衍生自具有SV40大T抗原。通过将含有逆转录病毒载体[RF84749]产生的病毒将SV40T抗原的Bgl I-Hpa I片段加入到兼嗜性包装细胞系PA317中。

    致癌性 没有
    效果

    不,裸鼠

    评论

    [RF84750] THLE-2和THLE-3细胞表达正常成人肝上皮细胞的表型特征。当注射到无胸腺裸鼠中时,它们是非致瘤性的,具有近二倍体核型,并且不表达甲胎蛋白。[RF84750] THLE-2和THLE-3细胞将苯并[a]芘为其最终的致癌代谢物,其加合DNA,这表明功能性细胞色素P450途径。[RF84750] THLE细胞也保留了其他参与化学致癌物质代谢的酶,如环氧化物水解酶,NADPH细胞色素P450还原酶,超氧化物歧化酶,过氧化氢酶,谷胱甘肽S-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶。

    [RF84750]发现1989年5月提交给ATCC的培养物被支原体污染。通过用BM Cycline进行21天治疗来治愈子代。在处理后6周时间后,通过Hoechst染色,PCR和标准培养试验测定细胞的支原体。所有测试均为阴性。固化的细胞系可以ATCC CRL-2706获得。

    继代培养 本方案中使用的体积为75 cm 2烧瓶; 按比例减少或增加其他大小的培养容器的解离培养基的量。

    注意:使用的烧瓶应预先涂上 0.01 mg / mL纤连蛋白,0.03 mg / mL I型牛胶原蛋白和溶于BEBM培养基中的0.01 mg / mL牛血清白蛋白的混合物。 

     
    1. 移除并丢弃培养基。
    2. 加入新鲜的0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液(2.0-3.0毫升,用于T75烧瓶)覆盖细胞,冲洗并除去大部分胰蛋白酶溶液,留下薄涂层。
    3. 使培养物在室温(或37℃)下静置直至细胞脱离并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散(通常在5至15分钟内)。

      注意:为了避免结块,在等待细胞分离时,不要通过敲击或摇动烧瓶来搅动细胞。难以分离的细胞可置于37℃以促进分散。

    4. 用0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂中和胰蛋白酶并通过轻轻吹打吸出细胞。通过温和离心(150xg至400xg,8-12分钟)除去解离剂,并将细胞重悬于新鲜的完全生长培养基中。 
    5. 将适当等份的细胞悬浮液加入新培养容器中。
    6. 在37°C孵育培养物。 
    7. 建议使用0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液(GIBCO目录号25300-054)进行解离。用0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂溶液(ATCC 30-2104)中和。

    亚文化比例: 1:3至1:6

    中等更新:每周两到三次。

    注意:有关细胞系的酶解和传代培养的更多信息,请参阅动物细胞培养中的第10章, R.Ian Freshney撰写的基本技术手册,第3版,由Alan R.Liss,NY,1994出版。

    冷冻保存

    冷冻培养基:补充有5%(v / v)DMSO的完全生长培养基

    储存温度:液氮气相

    文化条件

    气氛:空气,95%; 二氧化碳(CO 2),5%

    温度: 37°C

    LX-2 人肝星状细胞 ATCC

     

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    图标文献和实验
    相关实验
    • 肝星状细胞培养

      材料 相差显微镜,荧光显微镜,手术器械,雄性SD大鼠,体重250-450 g,戊巴比妥钠,200目尼龙网,小牛血清(或胎牛血清,则更好),DMEM,胰酶消化液(以HBSS配),Nycodenz(以GBSS配),D-Hanks'(KCl 0.4 g/L,KH2PO4 0.06 g/L,NaCl 8.0 g/L,NaHCO3 0.35 g/L,Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L,可加酚红 0.02 g

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