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- 细胞类型:
大肠杆菌
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 库存:
371
- 英文名:
E.coli DH5α Strain
- 运输方式:
干冰运输
- 规格:
1 mL
特别提示:包括大肠杆菌DH5α菌种在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:大肠杆菌DH5α菌种
英文名称:E.coli DH5α Strain
产品货号:BTN12-11y
产品规格:1 mL
本菌种是美国科学家D.Hanahan在1983年首次报道的K-12系大肠杆菌菌株,它是以DH1为基础构建的,是分子生物学中zuì常用的用于克隆的大肠杆菌菌株。
产品特点:
1.转化效率比DH1更高,适用于分子克隆。
2.脱氧核糖组成型合成,适合扩增制备高拷贝和大型质粒。
3.携带?-半乳糖苷酶?片段,如果外源基因携带此酶的?片段,则可以进行蓝白斑筛选重组子。
4.内源核酸酶EndA1缺失,提取的质粒DNA残留DNase少,质量高。
5.基于RecA的三套重组系统均缺失,质粒在复制过程发生重组、丢失和串环的可能性降到zuì低,使得插入片段稳定。
6.EcoK限制功能缺失(hsdR-),不能酶切在EcoK位点没有甲基化的DNA,但其修饰功能完整,故可以用EcoK位点非甲基化质粒通过本菌株制备其对应的甲基化质粒,后者可用来转化限制EcoK功能正常(基因型为hsdR+)的K-12系的大肠杆菌。
7.本菌株对常见抗菌素没有抗性。
基因型:
大肠杆菌DH5菌种的基因型是:K-12,F-,φ80,-,Δ(argF-lac)169,lacZ58(M15),ΔphoA8,glnX44(AS),deoR481,rfbC1,gyrA96(NalR),recA1,endA1,thiE1,hsdR17(各文献上报道的基因型稍微有所不同,此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料)。
大肠杆菌DH5菌种基因型符号及其含义列表如下:
| 基因型 | 表现型 |
| K-12 | K-12系的所有菌种默认都携带F因子和λ、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因,其产物可对甲基化的CG切割。 |
| F- | 此菌株缺失F因子 |
| λ- | 此菌株缺失λ原噬菌体 |
| φ80 | 携带φ80原噬菌体 |
| Δ(argF-lacZ)U169 | 也叫ΔlacU169,来于Hfr3000U169菌种,位于此区域的lac操纵子和过氧化氢敏感基因缺失,使细菌抗过氧化氢,实际缺失mmuP到argF和lac到mhpD的区域,实为Δ(mmuP-mphD) |
| rfbC1 | LPS合成缺失,缺失LPS有助于提高转化效率 |
| deoR481 | deo操纵子阻遏蛋白失活,脱氧核糖组成型合成,适合扩增制备质粒 |
| endA1 | 核酸内切酶I缺失 |
| glnX44(Am) | 同supE和 glnV,使琥珀终止子编码谷氨酰胺,为部分噬菌体生长所需 |
| gyrA96 | DNA促旋酶失活,导致对萘啶酮酸和荧光喹lín的抗性 |
| hsdR17 | EcoK系统的限制性内切酶Eco失活,不酶切非甲基化的Eco位点 |
| ΔlacZ58M15 | 原ΔlacZM15,携带来于M15菌株的、编码β-半乳糖苷酶的ω片段,与编码β-半乳糖苷酶α片段的质粒互补可,恢复酶活性,用于蓝白斑筛选 |
| recA1 | ATP依赖型重组酶失活,recBCD、recE和 recF三条重组路径均复丧失,重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒 |
| thiE1 | 原thi-1,不能合成硫氨(维生素B1) |
保存条件:-80℃,有效期一年。
我公司销售的大肠杆菌DH5α菌种价格,大肠杆菌DH5α菌株质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验相关专题 大肠杆菌的基因工程 Xl1-Blue菌株 基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。 特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。 用途:分子 克隆和质粒提取。 DH5α菌株 基因
苄青霉素的平板培养基上培养,只有转化体才能存活,而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。影响转化率的因素细胞生长状态和密度。转化的质粒 DNA 的质量和浓度。试剂的质量。防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。离心设备 实验试剂 大肠杆菌DH5α LB培养基, 0.1mol/LCaCl2溶液(预冷) 氨苄青霉素 pUC18质粒 实验步骤 菌株活化: 1.用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α,在LB培养基平板表面划线,于37℃培养16小时 2.挑取一个单菌落,转到3-
臂区域如果 GC 含量过高过低,或者有重复序列,都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构,影响重组效率,可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题:有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建,或者更换载体或感受态的方式尝试解决。 2. 质粒提取量不足 质粒提取量少常见的原因可能是: ①摇菌时间过长:大肠杆菌生长已经超过对数期,细菌老化,导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足:细菌生长不充分
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