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- 2025年11月10日
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文献和实验4. 滤纸、胶和膜的问题 X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别？ 解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。 就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480－600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段；硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80－100μg/cm2，对于200bp的核酸片段结合能力不强；PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125－300
,500- 1000μl/瓶) ，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g，5 min，取上清。 7.电泳分离：上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平， 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解
kDa预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD) 20次自产320元预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD) 50次自产680元分子量大小:210, 140, 106/102, 80, 52, 20 kDa预染的中高范围蛋白质分子量标准(18.3-210KD)2668148次Pierce1214元(二)蛋白质转印a)膜的选择:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比较如下: NC膜PVDF膜物理强度差好蛋白质结合能力80-100ug/cm2100-200ug/cm2溶剂耐受力无有考马
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