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- 2025年07月16日
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产品介绍
真核生物转录组（无参）测序，是获得真核生物特定组织或细胞在某一状态下转录出来的RNA的原始测序数据，质控后进行组装获得unigene，并以此为参考序列进行后续的功能注释、SNP、SSR标记开发等分析，以及多个样本的差异基因表达分析和差异基因功能富集分析等，发现新的功能基因，为进一步研究提供技术支撑。
针对真核生物，我们采用Illumina TruseqTM RNA sample prep Kit方法构建文库，其流程如下图所示：
针对无参考基因组的转录组研究，获得RNA-seq高质量测序数据后，需要将所有测序读段通过从头组装生成重叠群（contig）和单一序列（singleton）, 此项分析是后续处理及生物学功能分析的基础。 Trinity（http://trinityrnaseq.sourceforge.net/ , 版本号：trinityrnaseq-r2013-02-25） 是目前适用于Illumina 短片段序列组装的一款比较权威的软件，使用该软件对所有clean data进行从头组装。
技术流程
技术优势
- 可检测未知基因，发现新的转录本；
- 丰富的项目经验，组装和注释全方位分析基因表达水平和结构信息；
- 无需了解物种的基因或基因组信息，便可直接对任意物种进行全面的转录组分析。
送样要求
RNA总量：≥2ug
RNA浓度：≥100 ng/ul
RIN值：≥7.0
分析示例
GO多级分类注释分布饼图
KEGG注释统计
差异基因可视化散点图及火山图
上下调差异基因GO注释柱形图
SSR的分布情况
差异基因共表达网络图
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文献和实验结合细胞在组织中分布的位置信息和转录组基因表达信息，了解细胞在空间背景下的异质性。
研究意义；而同样情况下RASGRP1的检测数据可能不能说明问题。 由此可知，设计的实验如果没有生物学重复，或者生物学重复的数量不够，就不能得到有统计意义的实验结果；获得的差异表达的基因很可能仅仅是少数个体差异的表现，并不能反映疾病或者某种特定生理状态的群体本质特征。 3.生物学重复设置几个合适？ 您是不是有同样的问题：转录组测序是否必须进行生物学重复啊，是否要3个重复，是否可以用3个样品的RNA等量混合代替生物学重复，如果不重复能否发文章…..？一方面是有限的经费，一方面是编辑的质疑；实在很难
案例：应用全基因组测序和 RNA 测序来描绘常见的变异型免疫缺陷综合症（CVIDs）的基因图谱 背景：常见的变异型免疫缺陷综合症（CVIDs）是机体免疫应答反应中不能产生抗体的最主要原因。CVIDs 变异度很高，大概 5% 的病人是由基因改变引起的。 目的：利用 Illumina HiSeq2500 和 HTSeq 测序平台对 CVIDs 进行全基因组及转录水平的研究，揭示并绘制 CVIDs 的信号调控图谱。 结果：通过对 CVIDs 基因组和转录组进行测序和综合
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