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- 百奥莱博
- BTN90605B-VFR
- 北京
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
331
- 英文名：
TdT-Tailing DNA Labeling Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃
- 规格：
5次
特别提示：包括TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒
英文名称：TdT-Tailing DNA Labeling Kit
产品货号：BTN90605B
产品规格：5次
本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：
产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3′突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和dì高辛标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带dì高辛标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| TdT缓冲液，5× | 20μl |
| TdT(末端转移酶，10U/μL) | 10μl |
| dATP，2mM | 5μl |
| 标记核苷酸 | (A、B、C不同，见注) |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μl体系的标记反应(如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度)：
| 成份 | 用量 |
| 探针DNA | 100-200 pmol |
| TdT Buffer，5× | 4μl |
| 标记核苷酸，1mM (A型需自备标记核苷酸) |
1μl |
| dATP，2mM | (见下注) |
| TdT末端转移酶(10U/μL) | 2μl |
| 超纯水 | 补到20μl |
注：dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定zuì佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长)；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已)，每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/lǜ仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。
我公司销售的TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒北京供应商，TdT加尾法DNABiotin标记试剂盒质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验直标法因为Cy5标记效率低而导致Cy3、Cy5两种颜色信号强度不同的现象。试剂盒提供除荧光染料外的全部试剂，足够作10次标记。 6）Vysis公司的Microarray Nick Translation Kit 是配合Vysis公司的Genomic Microarray--AmpliOnc I Microarray的荧光标记试剂盒，采用缺口平移的方法将荧光标记的dUTP掺入纯化的样品基因组DNA中作为探针，和AmpliOnc I Microarray进行杂交。 除了厂家为自家的DNA
Chemiluminescent Hybridization & Detection Kit），即可组合出完整的非放射性检测分析系统。不过这个系统不适用于玻片基质的芯片的探针标记。 由于Atlas系列的DNA微阵列膜上每个点的核酸量有限，所以对标记探针的灵敏度要求非常高，一般情况下同位素是首选。如今Atlas SpotLight标记试剂盒特别提供逆转录所需的试剂，可以将2μg以上的mRNA或者50μg以上的RNA样品制备成生物素标记的单链cDNA探针，由于没有竞争性抑制，单链探针的灵敏度要大大高于双链探针。另外生物素标记
规应用的ELISA，适于临床实验室常规应用。另一种微孔板杂交法不 是采用夹心法，而是直接将特异探针固定微孔板上，然后用生物素 标记的PCR产物杂交。微孔板杂交与膜印迹杂交相比，有如下优点：①前者易操作；②固相微孔板漂洗时间短，节省了检测时间，因为 膜杂交过程中，反应剂要浸透膜中，漂洗时，使反应剂全部浸出需 要时间较长；③本底低，微孔板杂交不需Dehatdt液和预杂交以及封 闭过程。另外，微孔板固定的DNA不需再加热或UV照射。微孔板杂交的基本过程包括L：DNA的固定，探针的杂交和酶联显色。DNA
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