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- 英文名:
Lip2000 Transfection Reagent
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20
- 供应商:
上海吉至生化科技有限公司
- CAS号:
无
- 规格:
BR,1.5ml
超干溶剂,格式试剂,氘代试剂,色谱溶剂,医药中间体,分析对照品,生化试剂盒,染色液,现货10000+
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日本同仁 CCK8、潮霉素B 、K1622、蛋白酶K、异硫*酸胍
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文献和实验0.25%的trypsin+0.02%EDTA消化细胞传代,弯头吸管稍加吹打,可使细胞分散的很均匀,消化的时间一定要掌握好,时间不够不易吹下且对细胞造成机械损伤,消化过了成片脱落,再想吹打成单细胞悬液就不容易了;4、根据脂质体介导细胞转染的原理,在质粒提取时要除去内毒素,否则会降低转染效率;5、对于转染时DNA和脂质体的量说明书上有个推荐的范围,DNA (μg):Lipofectamine™; 2000 (μl)=1:0.5 ~ 1:5,可在此范围内设几个梯度摸索一下,从而找到最适比例;6、转染时用于
1、lipofectamine 2000毒性比较大,所以建议转染6 h后换去转染培养基; 2、采用先铺板再转染的方式比采用同时转染的方式效率会高,但需根据实验需要设计,如果采用前种方式,细胞的汇合度一定要在80%以上再转染(说明书上好像是达到90%); 3、采用0.25%的trypsin+0.02%EDTA消化细胞传代,弯头吸管稍加吹打,可使细胞分散的很均匀,消化的时间一定要掌握好,时间不够不易吹下且对细胞造成机械损伤,消化过了成片脱落,再想吹打成单细胞悬液就不容易了; 4、根据脂质体
3) 转染准备:用2ml不含血清培养基漂洗2次,再加入1ml不含血清培养基。 4) 转染:把A/B复合物缓缓加入培养基中,摇匀,置37℃温箱中6-24h,吸除无血清转染液,换入正常培养基继续培养。 5) 其余处理:如观察、筛选、检测等与其他转染法相同。 6) 注意:转染时切勿加血清,血清对转染效率有很大影响。 2. 快速脂质体转染法操作步骤(方法二): 1) 将细胞以5 x 105个/孔接种于6孔板中培养24
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