脂质体2000/Lip2000转染试剂

Lip2000是-种新型的阳离子脂质体转染试剂，适合于将核酸(DNA和RNA)转染至真核细胞,具有低细胞毒性、对多种类型的细胞都具有高转染效率、转染时血清的存在不影响转染效率的优点。.

适用范围:贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。

质粒DNA的转染:对大多数细胞来说, DNA(μg)与Lip200(μl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。

使用说明(以24孔板为例)

1、细胞铺板

贴壁细胞:转染前一天,用500μI不含抗生素的培养基接种0.5-2×10⁵细胞,使之第二天能达到70-90%汇合。

悬浮细胞:在准备DNA-Lip2000复合物之前,用500μl不含抗生素的培养基接种4-8×10⁵细胞即可。

2、对每个转染样品,进行以下操作

(1)在离心管里分别加入50μl无血清培养基(如OPTI-MEM 1 培养基) 和0.8μg DNA,轻柔混匀,制成DNA稀释液。

(2)在另一个离心管里分别加入50μl无血清培养基(如OPTI-MEM I 培养基)和2.0μl Lip2000 (注意用前先混匀) ,轻柔混匀,制成Lip2000稀释液,室温静置5分钟。

(3)将DNA 稀释液和Lip2000 稀释液混合, 轻柔混匀,室温静置20分钟, 形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。

3、将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。

4、在37°CCO,培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18-48小时

5、如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高 的比例接种到新鲜培养基中,第二天加入选择性培养基进行筛选。

质粒DNA转染的优化:为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化, -般在1:0.5~1:5 的范围内优化DNA (ug)和Lip2000 (μl)的比例。

保存条件

2-4°C保存一年(避免冷冻)。