- ¥1990
- 联迈生物
- LM13-3180
- 中国/上海
- 2025年10月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Pear Blister Canker Viroid(PBCVd)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
50次
中文名称：梨疱症溃疡类病毒RT-PCR试剂盒
英文名称：Pear Blister Canker Viroid(PBCVd)
规格：50次
运输：低温
保存：-20度
有效期：一年
货期：一周
产品及特点
1.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2.荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
3.提供阳性对照，便于分析实验结果。
4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳，本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
1.在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
一．PCR 检测（20 μL 体系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验相关实验
胃癌细胞株(MKN-45,AGS)基因表达谱的改变。CagA阳性H.pylori上调胃癌细胞株2 304条基因中的8条。其中6条基因(IL-8，I(κB)α，A20，ERF-1，角蛋白K7，谷胱甘肽过氧化物酶)经RT-PCR证实。等位基因cagE阴性突变[(δcagE)与致病岛(PAl)的其他基因共同编码Ⅳ型分泌系统]的H.pylori不能上调这些基因。显示基因芯片可以作为研究对宿主基因复杂影响的工具。 Israel等应用H.pylori全基因组芯片分析从不同临床相关疾病分离的H.pylori基因组差异，寻找
（葡萄糖＋半乳糖） 麦芽糖（两分子葡萄糖） 三糖 棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖） 多糖 菊糖（多分子果糖） 淀粉 醇类 侧金盏花醇 卫茅醇 甘露醇 山梨醇 非糖类 肌醇 2．葡萄糖代谢类型鉴别试验 (1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）试验
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梨疱症溃疡类病毒RT-PCR试剂盒
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