Streptavidin-HRP ELISA 1mL

HRP显色

显色（HRP酶） 1．增强化学发光法(ECL) Ecl 显色原理：氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物，是最常用的一类化学发光剂。鲁米诺（luminol，5＇-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮）的分子结构及化学反应式如下： 鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。

几种 HRP 底物及其操作

机以便于记录结果)。    2．操作步骤    (1)氯萘酚贮存液的准备：用10ml无水乙醇溶解0．3g氯萘酚，贮存于—20℃；    (2)加100ul氯萘酚贮存液至10ml 0．05mol／LTris(pH7．6)，    (3)加0．1ml 3％过氧化氢于水中。过氧化氢一般是以30％的溶液提供，4℃可存放1个月；    (4)白色沉淀可用滤纸过滤去除；    (5)加此溶液到标本中，并在室温孵育10～40min，水洗终止反应；    (6)优化：如果需要，进行复染，但只可使

HRP标记抗体的方法

一、戊二醛二步法1. 原理戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤（1）称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室温静置过夜。（2）反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。（3）将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。（4）用1M