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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
12
- 英文名:
DAB kit (20×)
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃避光密闭
- 规格:
1mL
DAB 染色试剂盒简介
二氨基联ben胺(DAB)是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物,反应产物为不溶于水、本产品采用特殊配方,灵敏度高,背景低,储存稳定,使用方便。适合于蛋白印迹、免疫组织化学和免疫细胞化学、斑点印迹和生物芯片等的染色和显色反应。编号:XK-SHSJ-1001
包装规格
| 组分 |
规格 1 |
规格 2 |
| DAB 显色液 A(20×) |
0.5mL |
1mL |
| DAB 显色液 B(20×) |
0.5mL |
1mL |
用法
1.临用前配制 10 mL 1×DAB 显色工作液:将 0.5 mL 20× DAB 显色液 A 加入 9 mL 1×PBS 中并涡旋混匀。向 DAB / PBS 混合物中加入 0.5 mL 20×DAB 显色液 B 涡旋混合均匀。 可以根据需要按比例缩放体积。 注意:不要使用含有叠氮hua钠的缓冲液,叠氮hua钠是一种 HRP 抑制剂。
2.在样品的最后一次洗涤完毕后,去除洗涤液,加入足够 的 DAB 显色工作液,确保能充分覆盖样品。室温避光孵育 3-30 分钟或更长时间,直至显色达到预期深浅。免疫印迹实验, 应保证样品在一个足够多的染色液中且能被自由晃动。
3.去除 DAB 染色工作液,用 PBS 冲洗样品几次以中止显色反应。对于用显微镜观察的细胞或组织样品,可复染样品(可选)并安装在水性封固介质中。或者,可以将样品脱水并安装在有机封固剂中。免疫印迹实验,可将样品用水冲洗,风干,然后在室温下储存。
储存与运输
-20℃避光密闭保存,一年有效。避免反复冻融。2~8℃运输,在途时间 5 天对试剂无影响。
DAB 染色试剂盒注意事项
1.DAB 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
2.显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用。
3.显色时间严格控制,根据情况调整,以免显色过度。固相膜显色数小时后即会褪色,不能永久存在。
4.请将沾有DAB 显色液A 的容器等放在含有 3% KM-nO4,2% NaHCO3 的溶液浸泡 3h, 以减少污染。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品, 不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
DAB 染色试剂盒常见问题与分析
a.在免疫组化时如果背景显色太深,一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭,例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面,请注意选购经过适当吸附的二抗,以减少二抗的非特异性吸附。
b.在免疫组化时如果背景显色太深,需注意灭活内源性过氧化氢酶。
c.可以考虑缩短显色时间,或降低二抗浓度。
d.选择适当强度的洗涤液,或延长洗涤时间。
二.没有显色或显色太弱。
a.可以考虑适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果,滴一滴稀释二抗在膜上,检测二抗是否可以被正常显色。
b.可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系,例如使用生物素检测体系。
c.可以适当延长显色时间,另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。
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文献和实验时样本之间干扰。 Q:说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ,细胞量多的话对检测结果有没有影响? A:建议细胞量最多不要超过 106个,过量的细胞相当于染料被稀释,影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了,通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q:是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer? A:不行,Binding Buffer 是必须要加的,Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+,Binding
1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活,必须了解酶催化反应总的反应式,而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量,使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
reactivity中无检测组织的种属,这是比较常见的错误;一抗选择rat,而二抗是抗mouse/rabbit等均有可能出现阴性结果。 (2)抗体孵育时间过短,容易导致阴性结果。一般一抗我建议4度孵育过夜和37度复温45 min;二抗我一般37度30 min。我不喜欢参照二抗染色试剂盒说明书。 (3)抗体浓度过低。这是阴性结果的最可能原因。必须提高稀释度,我一般初次做一种新抗体,喜欢先用说明书建议的低浓度和高浓度做一次,然后决定是向高还是低方向摸索。一般先决定二抗的浓度(工作液就好办了,直接滴加
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