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文献和实验30pg与Hiload Superdex 75pg建议在20%乙醇中加入0.2M NaAc,以保持pH的稳定)。再次强调,20%乙醇的粘度比较高,请注意降低流速。如果长期保存或者需要运输,请链接保护装置以避免因为环境的改变而引入的气泡。 其实,分子筛的使用并不复杂,只要胆大心细,认真耐心,一定能获得好的实验结果~
柱体积 30%。 分子筛 膜蛋白的纯化流程中,分子筛是理想化的最终步骤。不仅可以去除聚集体以及与目的蛋白大小不同的杂质,还可以进行缓冲液更换。这些因素往往能够决定后续的结构测定是否顺利。 推荐使用高分辨率分子筛大体积预装柱 Superdex 200 Increase 10/300 GL 和 Superose 6 Increase 10/300 GL。其最大上样量可达 500μL。 案例分析 外膜蛋白 A (Outer membrane protein A, OmpA) 是革兰氏阴性菌外膜蛋白质的主要
, and 20 mMTris-HCl, pH 7.5, sterile filtered. 5. Syringe (30–50 mL) with 0.2-μm pore size filter. 2.3.2. Step 2: IMAC 1. Sample: Pooled Wnt3A containing fractions from Section2.3.1 . 2. HiTrap? Chelating, 1-mL column (GE Healthcare, Piscataway
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