GE 29219757 Superdex 30 Increa

膜蛋白纯化攻略分享

柱体积 30%。 分子筛 膜蛋白的纯化流程中，分子筛是理想化的最终步骤。不仅可以去除聚集体以及与目的蛋白大小不同的杂质，还可以进行缓冲液更换。这些因素往往能够决定后续的结构测定是否顺利。 推荐使用高分辨率分子筛大体积预装柱 Superdex 200 Increase 10/300 GL 和 Superose 6 Increase 10/300 GL。其最大上样量可达 500μL。   案例分析 外膜蛋白 A (Outer membrane protein A, OmpA） 是革兰氏阴性菌外膜蛋白质的主要

最难搞的膜蛋白纯化攻略来了！

5 ml 或 HiPrep 26/10 Desalting 53 ml 两种常用柱型。最终上样体积不要超过柱体积 30%。 分子筛 膜蛋白的纯化流程中，分子筛是理想化的最终步骤。不仅可以去除聚集体以及与目的蛋白大小不同的杂质，还可以进行缓冲液更换。这些因素往往能够决定后续的结构测定是否顺利。 推荐使用高分辨率分子筛大体积预装柱 Superdex 200 Increase 10/300 GL 和 Superose 6 Increase 10/300 GL。其最大上样量可达

分子筛，你今天保养了吗

10分钟取上清）避免颗粒物堵塞柱子。另外，需要确保实验过程中，pH、温度等条件下，样品不会变性或聚集沉淀。如果需要使用助溶的试剂（例如去污剂），请确保实验过程中的样品、溶液中同时添加。 3. 缓冲溶液：分子筛属于非吸附式层析，只需要一种缓冲溶液，具有非常好的兼容性，基本上我们只需要考虑蛋白的稳定性来选择合适的缓冲液。一般我们在实验中会加入150-300mM的NaCl，以降低非特异的吸附。使用不同的溶液的时候，因为溶液本身粘稠度的不同，请适当降低流速以保护柱子。 4. 常规清洗：定期的清洗能够