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- 2025年07月12日
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文献和实验相关专题 (一) 原理 葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与多种哺乳动物 IgG分子Fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。利用改变PH及离子强度可洗脱结合于SPA-Sepharose CL-4B柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。 (二) 操作步骤 用0.1M PH8.0 磷酸缓冲液 浸泡SPA-Sepharose CL-4B凝胶，15min。按1g干胶200ml
抗体纯化：SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法
4.0 0.1mol/l pH3.0 分别+0.02% NaN34、1mol/l pH9.0 tris-HCl溶液5、再生缓冲液（1）0.1mol/l tris含0.5mol/l NaCl调整pH至8.6+0.02% NaN3；（2）0.1mol/l 醋酸钠含0.5mol/l NaCl调整pH至2.2+0.02%NaN3。三、操作步骤用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液浸泡SPAF-sepharose cl-4b凝胶，15min。按1g干胶200ml上述缓冲液充分洗涤凝胶，（用玻璃漏斗过滤或置烧杯中洗涤）。↓
利用SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法分离纯化IgG抗体
液 (1)0.1mol/l tris含0.5mol/l NaCl调整pH至8.6+0.02% NaN3; (2)0.1mol/l 醋酸钠含0.5mol/l NaCl调整pH至2.2+0.02%NaN3。 三、操作步骤 1.用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液浸泡SPAF-sepharose cl-4b凝胶，15min。按1g干胶200ml上述缓冲液充分洗涤凝胶，(用玻璃漏斗过滤或置烧杯中洗涤)。 2.装柱后用0.1mol/l pH8.6磷酸
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