Cu/ZnSOD抗体

如何提高 HIS 标签蛋白纯化效果

液的 pH、盐离子浓度、添加剂（如 5% 甘油、1mM DTT) 等。   原因三 HIS 标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议 1 用 anti-HIS 的抗体进行 WB，检测 HIS 标签是否存在。 建议 2 将蛋白用 4-6M 盐酸胍或 4-8M 尿素变性后，让 HIS 标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议 3 改变 HIS 标签的位置或者增加其数目（常用 6-12 个 HIS），增加暴露和结合机会。 建议 4 改变金属结合离子，除了 Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+ 也可以用来进

His标签蛋白纯化效果不理想？小贴士来帮你！

离子浓度、添加剂（如5%甘油、1mM DTT）等。 原因三 His标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议1 用anti-His的抗体进行WB，检测His标签是否存在。 建议2 将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后，让His标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议3 改变His标签的位置或者增加其数目（常用6-12个His），增加暴露和结合机会。 建议4 改变金属结合离子，除了Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。 2、His标签蛋白结合了，但是洗脱不充分 原因

一文搞定纯化实验 7 大常见问题！

2+、Cu2+、Co2+ 等。 B：若目的 His 标签蛋白未洗脱 ● 洗脱条件过于温和：增加咪唑浓度或降低洗脱 pH（注意：pH 降至 4.0 以下时 Ni2+ 会发生脱落）。 ● 目的蛋白与填料发生非特异性疏水或其他相互作用：在洗脱缓冲液中加入非离子型去垢剂（如 2% Triton X-100）或提高 NaCl 浓度。 ● 目的蛋白在填料中发生了沉淀：减少上样量；使用咪唑线性梯度而不是步级洗脱以降低洗脱得到的蛋白浓度；使用去垢剂或改变 NaCl 浓度；在变性条件（4～8 M 尿素或 4～6 M 盐