辣根过氧化物酶标记人胰岛素蛋白

HRP (辣根过氧化物酶) 标记抗体流程

1.         8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶，加入1 ml双蒸水溶解，液体呈棕色。 2.         放入一个磁力搅拌子，电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml，室温下继续搅拌40 min，液体呈现草绿色。 3.         将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中，4 oC 对1  mM pH 4.4的NaAc透析过夜，中间换液3－4次，每次300 ml，溶液最终呈浅棕色。 4.        

辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序

辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序       1．组织切片脱蜡处理等同前；       2．流水冲洗5分钟，3％H2 O2 孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶，避免假阳性)；       3．PBS漂洗3次，每次5分钟；       4．1％牛血清白蛋白孵育，室温20分钟，移去多余液体；       5．加入PBS稀释的辣根过氧化物酶―凝集素，置湿盒内孵育。室温1．5小时；       6．PBS漂洗3次．每次5分钟；       7．呈色  DAB

蛋白质印迹分析(Western Blot Analysis)

缓冲溶液中，转移时间可从45分钟延长到过夜进行。 由于湿法的使用弹性更大并且没有明显浪费更多的时间和原料，因此我们在这里只描述湿法的基本操作过程。 对于目的蛋白的识别需要采用能够识别一抗的第二抗体。该抗体往往是购买的成品，已经被结合或标记了特定的试剂，如辣根过氧化物酶。这种标记是利用辣根过氧化物酶所催化的一个比色反应，该反应的产物有特定的颜色且固定在固相载体上，容易鉴别。因此可通过对二抗的识别而识别一抗，进而判断出目标蛋白所在的位置。其他的识别系统包括碱性磷酸酶系统和 125