生物素标记的兔抗长爪沙鼠IgG

双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤

FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy

ELISA 原理与分类

法测定IgM抗体，导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐，用这类试剂检测抗CMV IgM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。 7.ABS-ELISA法 ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。亲和素是一种糖蛋白，分子量60000，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成。生物素为小分子化合物，分子量244。用化学方法制成的衍生物素- 羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物，标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强

胶体金标记物的制备

胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl.测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测定其pH即可。几种常用的蛋白质标记时胶体金所用的pH值见表5-4.表5-4 常用几种蛋白质标记时胶体金所用的pH值如下 蛋白质pH抗体（γ球蛋白）9.0亲合层析的IgG7.6单克隆抗体8.2F（ab＇）27.2SPA(葡萄球菌蛋白)6.0蓖麻子植物凝血素Ⅰ8.0蓖麻子植物凝血素Ⅱ8.0花生凝集素6.3Helix pomatia lectin