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60
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深圳子科生物科技有限公司
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4 X 1.25 ml
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文献和实验一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
NaOH 中浸泡 10 分钟,用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。 当然,这些也不是绝对的要求。如果是操作熟练。完全可以用初次开封的离心管和枪头,新过滤的超纯水,进行 RNA 的提取。 2. Mix 配制 一般来讲,进行 real-time qPCR MasterMix 都是 2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于 real-time qPCR 灵敏度高,所以每个样品至少要做3 个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于 Ct 相差较多或者 SD 太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应
Real-time qPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手
或者校正染料(reference dye,passive dye)常用的是ROXTM(现在已经是ABI的注册商标了!)或者其他染料,只要不影响检测PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加ROXTM染料校正。 通常来讲,real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR
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