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pZERO载体克隆试剂盒(不包括内切酶)

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      用它的Silencer siRNA Cocktail Kit(RNase III)试剂盒成功关闭几个基因,包括c-fos, GAPDH, La, ?-actin, 和Ku-70。最适用于:快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型不适用于:长时间的研究项目,或者是需要一个特定的siRNA进行研究,特别是基因治疗体内表达前面的3种方法主要都是体外制备siRNAs,并且需要专门的RNA转染试剂将siRNAs转到细胞内。而采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架则属于:从转染到细胞的DNA模版中在体内转录得到siRNAs

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        siRNA表达框架(siRNA expression cassettes,SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版,能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用,包括一个RNA polⅢ启动子,一段发夹结构siRNA,一个RNA pol III终止位点。与siRNA表达载体不同的是,SECs不需要载体克隆和测序等颇为费时的步骤,可以直接由PCR得到,耗时不到一天。因此,SECs成为筛选siRNA的最有效工具

    • 如何提高PCR产物克隆的效率

      ,能够以模版为准切掉错配的碱基,因而得到的PCR产物多数是平末端,不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点,单酶切得到平末端的线性片断,直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒,不过较少用。平末端的连接效率低,通常需要高浓度的连接酶,较长的连接时间,合适的片断:载体比例,有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇(PEG2000),以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒

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