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美国GENMED主要运用世界上最尖端的基因综合技术平台(数字化染色体基因型完全分析技术、表观基因组完全分析技术、染色体单体分离分析技术、基因靶标技术、全基因表达完全分析技术、RNA拼接图谱综合分析技术、SiRNA完整表达文库构建技术、细胞抗原谱学技术、胶体金层析法金标技术、蛋白激酶组学完全分析技术、蛋白表位标记技术、Seldi蛋白质谱分析技术、高容量细胞荧光筛选技术、高通量远红外细胞免疫筛选技术),从事疾病指纹诊断系统、农作物种子改造和分子操作、生物反应器、中草药和海洋生物抗肿瘤活性物质筛选、基yin检测中心、技术平台服务和培训等独步天下的杰美产品和服务体系的开发,以期成为基因医学产业化的领军企业。
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文献和实验Q:Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么? A:Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合,将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,核染料 PI 或 7-AAD
的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型,绿色荧光)为例) TUNEL检测:使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min,再使用二甲苯脱蜡2次,每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗,便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
得到“老化”的凝胶与玻片粘合不紧,容易在液体浸泡处理和电泳过程中自然脱落,造成实验失败;反之,如果放置时间过长,凝胶极易干裂而脱落。第2层凝胶是1%低凝点(26±2)℃琼脂糖液,与细胞混合时琼脂糖液的温度30~37℃,温度过高可引起细胞损伤,此操作过程力求快速,以免加速细胞DNA的修复。2.细胞数和实验温度的影响:(1)实验细胞数应调至约3.0×105,如果细胞数过低,一张片子中细胞数太少,很难完成100个彗星计数分析;反之细胞数过高,片中细胞过密,位于不同层面的细胞相互重叠,难以分析彗星DNA
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