乙型肝炎病毒通用型PCR试剂盒

产品简介：
乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus,HBV）是引起乙型肝炎（简称乙肝）的 病原体，属嗜肝 DNA 病毒科，该科病毒包含正嗜肝 DNA 病毒属和禽嗜肝 DNA 病毒属两个属，引起人体感染的是正嗜肝 DNA 病毒属。HBV 感染是全球性的 公共卫生问题，因此 HBV 检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发， 它具有下列特点：
1. 即开即用，只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增 HBV。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
乙型肝炎病毒通用型PCR 引物混合液	13-37080yw	100 μL（白盖）
乙型肝炎病毒通用型PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-37080pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-37080sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL HBVPCR 阳性 对照的 100 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E6 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此 为 100 倍稀释液。）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总 体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为 制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
乙型肝炎病毒通用型PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（超纯水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（乙型肝炎病毒通用型PCR 阳性对照的 10000倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	58℃	30sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 104bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。