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- 2025年07月16日
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- 文献和实验
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‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 规格：
50次
| 编号 | 成分 | 十孔盒包装（去纸托） |
| 试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL（亮黄盖） |
| 试剂二 | 成分 PCR 引物混合液 | 100 uL（白盖） |
| 试剂三 | 成分 PCR 阳性对照 | 50 uL（黄盖） |
| 试剂四 | 超纯水 | 1 mL（本色盖） |
| 试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次（成分见下） |
| 试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL（白盖） |
| 试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL（绿盖） |
| 试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL（红盖） |
| 试剂九 | 使用手册 | 1 份 |
简并性引物对PCR扩增有无影响?
有影响。简并数量应尽量少。
通常一条引物中简并的碱基不要超过4处，如果简并的碱基数过多，则会造成反应体系中有效引物的量相对减少，此时应适当增加引物的使用量。但引物量过大，容易引起非特异扩增，应加以注意。
适合的模板添加量是多少?
根据基因组DNA、质粒DNA及反转录产物等模板种类不同，PCR反应的适合模板添加量也不同。 特别是使用PrimeSTAR® HS DNA Polymerase时，过剩的模板量有时会对PCR扩增产生阻害作用。 另外，使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时，根据模板种类、模板使用量及模板质量可调整PCR反应条件。
使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时，模板可按以下推荐量添加（50 μl反应体系）：
· Human genomic DNA：5～200 ng
· E.coli genomic DNA: 100 pg～100 ng
· cDNA Library：1～200 ng
· λDNA：10 pg～10 ng
· 质粒DNA：10 pg～1 ng
PCR产物 (3‘端附有A碱基时) 经末端平滑后，克隆于去磷酸的平滑末端载体时，其PCR产物需不需要5′末端磷酸化?
需要。一般的PCR用引物5′末端都不带磷 (除非在引物合成时已特别标记)。使用这种引物进行PCR的PCR产物经末端平滑化后，与去磷酸的平滑末端载体连接之前，PCR产物必须进行5′末端磷酸化。
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文献和实验，结果发现使用Marathon TM所得到的片断总是比采用SMARTsup]TMRACE试剂盒到所得到的片断短。其原因在于Marathon TM技术反转录反应往往不能真正达到mRNA的5’末端。所以认为，进行RACE反应应当优选SMARTTM RACE试剂盒。以下就国内目前应用最广的SMART TM RACE试剂盒为例，简要概述RACE技术的原理和操作过程。 SMARTTM 3‘-RACE的原理是:利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核营酸序列通用接头
MarathonTM所得到的片断总是比采用SMARTTM RACE试剂盒到所得到的片断短。其原因在于MarathonTM技术反转录反应往往不能真正达到mRNA的5' 末端。所以认为，进行RACE反应应当优选SMARTTM RACE试剂盒。以下就国内目前应用最广的SMARTTM RACE试剂盒为例，简要概述RACE技术的原理和操作过程。 SMARTTM 3'-RACE的原理 利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo（dT）30MN
1(gene specific primer,GSP)作为上游引物，用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作为下游引物，以cDNA第一链为模板，进行PCR循环，把目的基因3‘末端的DNA片段扩增出来。 RACE系列栏目 ： RACE试剂盒 PCR/RT-PCR/qPCR RACE 方法相关产品: RACE试剂盒 SAGE 试剂盒
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