小鼠黑色素瘤细胞(B16)

小鼠黑色素瘤细胞(B16)
细胞特性
1)来源：小鼠黑色素瘤
2)形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

小鼠黑色素瘤细胞(B16)运输和保存：使用T25瓶充液发送活细胞。收到细胞后，请先在显微镜下检查细胞生长状态，并将T25瓶置于培养箱约6h或过夜后，再次检查细胞状态。若状态良，可按照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物，请及时与我们取得联系。
细胞用途：仅供科研使用。

细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPIVM-1640培养基,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八，丙钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%完全培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
小鼠黑色素瘤细胞(B16)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培
养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。

注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染， 请立即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作， 并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。